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海洋硫酸多糖911抗艾滋病毒作用及其机理研究--体内对猴免疫缺陷病毒(SIV)增殖的影响
采用体外细胞培养技术和病毒体内感染模型,通过Elisa、定量PCR、流式细胞术等方法,研究了海洋硫酸多糖911体外对HIV-1复制及体内对SIV增殖的影响,并初步探讨其作用机制.结果发现911可明显抑制HIV-1对MT4细胞的急性感染和H9细胞的慢性感染,其半数有效浓度(EC50)分别为4.44mg·L-1和0.32mg·L-1;并可明显降低猴血浆中病毒滴度及RNA拷贝数,对血液中CD4+细胞具有一定的保护作用,同时可升高血液中病毒抗体的含量;并可明显抑制病毒逆转录酶活性,对HIV-1无明显直接灭活作用,但可明显干扰HIV-1与细胞的吸附,半数有效浓度(IC50)为36.51μg·L-1.提示911体内外均可抑制艾滋病毒的增殖,为高效的艾滋病毒增殖抑制剂,其作用机制与干扰病毒与细胞吸附、抑制病毒逆转录酶活性有关.
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替换HIV-1衣壳蛋白基因SHIV的构建及其活性测定
将猴免疫缺陷病毒(Simian immunodeficiency virus,SIVmm239)中gag基因的衣壳蛋白部分置换成人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus type1,HIV-1 HXBc2)的相应部分,构建出替换了衣壳蛋白基因的人/猿嵌合免疫缺陷病毒(SHIV)原病毒DNA.用此SHIV原病毒DNA转染293T细胞,细胞中能够检测到嵌合病毒基因的转录与翻译;在细胞培养液上清中亦可检测到装配出的病毒颗粒.病毒颗粒形态正常,含有基因组RNA,具有反转录酶活性,嵌合的外源衣壳蛋白能够正确剪切,形成棒状的核心.将此嵌合SHIV病毒感染MT4细胞,病毒能够吸附并进入细胞,能完成反转录过程,但不能增殖.
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艾滋病猕猴模型的肠道病理学研究进展
HIV是导致AIDS的病原体,HIV感染后会引起机体免疫缺陷并导致多个器官的损伤,其中肠道损伤是HIV感染后常见的病变之一.肠道损伤既是HIV致病的直接诱因,也能间接地影响机体多项免疫功能进而加速疾病进展.非人灵长类动物在组织结构、免疫、生理和代谢等方面与人类具有高度相似性,而且在SIV感染后的发病过程和病理特征与人AIDS症状非常相似,故其作为HIV研究的模型动物被广泛运用.本文对SIV感染非人灵长类所致的肠道组织病理变化,免疫细胞及分子的变化,肠道菌群及易位对AIDS的影响,以及治疗对肠道损伤的作用等方面研究进展进行介绍.通过对SIV感染后组织病理学和免疫学变化的认识,将有助于了解艾滋病发病机制,研发抗HIV药物和疫苗以及研究病人的治疗策略.
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TUNEL法检测重组vMIP-Ⅱ对SIV感染模型淋巴细胞凋亡的影响
目的探讨TUNEL技术检测的vMIP-Ⅱ对SIV感染的猴淋巴组织中淋巴细胞凋亡的影响是否与其引起的感染淋巴组织中细胞的增殖有关.方法取3个剂量组的vMIP-Ⅱ注射治疗后的SIV感染模型的淋巴组织标本,用TUNEL法检测每个剂量组动物模型淋巴细胞凋亡率.结果vMIP-Ⅱ治疗的3个剂量组与实验对照组相比、组间相比细胞凋亡率无显著性差异(P＞0.05).结论3个剂量组的vMIP-Ⅱ对SIV感染后的猴淋巴组织淋巴细胞凋亡无影响,但药物剂量与细胞凋亡率却呈负相关.
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重组病毒巨噬细胞炎性蛋白抗SIVmac251的体外研究
目的研究重组病毒巨噬细胞炎性蛋白vMIP体外抗猴艾滋病毒SIVmac作用效果和机制.方法分别在SIVmac接种前后将敏感细胞系与重组vMIP作用,检测细胞系病变(CPE)情况和病毒滴度水平,培养上清P27抗原水平.结果先用重组vMIP处理过的细胞,病毒感染后细胞病变程度很轻,培养上清P27抗原和病毒滴度水平明显低于对照组,先感染病毒再用重组vMIP处理组,病毒P27抗原水平和细胞内病毒滴度水平也显著降低,但降低程度不如先用重组vMIP处理后感染病毒组.结论重组vMIP有明显的抑制病毒进入靶细胞和保护靶细胞免受病毒感染的作用,进入靶细胞的抑制作用强于对已感染细胞的病毒抑制作用;说明主要作用机制为阻止病毒进入靶细胞,同时可能也通过某种机制抑制细胞内SIVmac病毒的产生.
关键词： 重组病毒巨噬细胞炎性蛋白 vMIP SIV -
Her2/ECD-sf162/TM融合杆状病毒表达及鉴定
目的：获得融合表达的Her2/ECD-sf162/TM杆状病毒，为后续基于SIV Gag蛋白的Her2病毒样颗粒疫苗的制备奠定实验基础。方法：将Her2胞外段基因与猴免疫缺陷病毒（ simian immunodeficiency virus， SIV）包膜蛋白sf162跨膜区基因融合的Her2/ECD-sf162/TM PFastBac重组表达载体，转座大肠杆菌E. coli DH10Bac菌株，获得重组杆粒，在昆虫细胞中表达获得重组杆状病毒，Western blot方法对该病毒进行鉴定。结果：构建的Her2/ECD-sf162/TM杆状病毒表达载体经PCR鉴定正确，转染昆虫细胞后获得了重组杆状病毒，该融合杆状病毒蛋白可与抗Her2抗体发生免疫反应。结论：成功构建的Her2/ECD-sf162/TM杆状病毒可用于Her2病毒样颗粒疫苗的制备。
