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丹参CYP76AH1转基因毛状根的建立及其蛋白的分离
蛋白质复合物参与植物多种次生代谢物的合成,其分离对阐明植物次生代谢及提高体外催化效率至关重要.该研究构建了过表达丹参酮合成途径关键酶CYP76AH1的转基因毛状根株系,通过Western杂交筛选得到高表达CYP76AH1蛋白的丹参转基因毛状根,并以此作为后续提取丹参酮合成途径中蛋白质复合物的组培材料.通过优化蛋白提取缓冲液中的去污剂种类和浓度,筛选出含0.5％ Triton X-100的缓冲液为佳提取缓冲液,并分离得到相对大量的可溶性CYP76AH1蛋白质.该研究为后续进一步分离纯化与CYP76AH1相互作用的蛋白质复合物奠定了基础,也为深度解析丹参酮合成代谢通路提供思路.
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蛋白质复合物组计算预测方法的研究与展望
当今系统生物学研究的重要课题之一就是蛋白质复合物组。对蛋白质复合物组中的蛋白质复合物及其相互作用进行全面、深入的研究，可以实现对蛋白复合物参与整个细胞生物进程的了解。近年来，大量从蛋白质组学数据中预测蛋白质复合物而得到复合物组网络表达的计算方法、计算模型已被开发出来，这类计算预测方法为生命活动的复杂规律研究提供了重要手段。现将蛋白质复合物组计算预测方法关于生物信息学的研究进步及在各研究领域的应用综述如下，并对其发展前景进行了展望。
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女贞子中齐墩果酸的定性分析及其与人血清白蛋白相互作用的电喷雾质谱研究
目的:对女贞子中主要药用成分进行定性分析,用电喷雾质谱法探究人血清白蛋白与齐墩果酸相互作用.方法:定性分析采用高效液相色谱电喷雾高分辨质谱(HPLC-ESI-MS)法,色谱柱使用Agilent ZORBAXEclipse XDB-C18柱(2.1×150 mm,5-Micron),流动相为甲醇(A)-0.1％乙酸水溶液(B),梯度洗脱:0～30 min 10％-90％A,30～40 min 90％A,40-60 min 90％～10％A,柱温:30℃,进样量:1 μL,流速:0.2 mL· min-1,女贞子乙醇提取物采用HPLC-ESI-MS负离子检测模式.结果:采用HPLC-ESI-MS定性地检测了女贞子乙醇超声提取液,鉴定出9种有效成分(齐墩果酸、红景天苷、特女贞苷、橄榄苦苷、芹菜素、委陵菜酸、2α-羟基熊果酸、2α-羟基齐墩果酸和19α-羟基-3-乙酰乌索酸).电喷雾质谱观测到齐墩果酸能与人血清白蛋白形成较为稳定的1:1蛋白质复合物,其结合常数为1.63×104L·mol-1.结论:该方法定性分析了女贞子乙醇提取物中主要药用成分,首次用电喷雾质谱法研究了人血清白蛋白与齐墩果酸的相互作用,从分子水平上揭示了齐墩果酸与人血清白蛋白相互作用的质谱信息.
