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外源性表皮生长因子对马兜铃酸-Ⅰ所致细胞增殖抑制作用的影响
目的:探讨加入外源性表皮生长因子(EGF)能否改善马兜铃酸-Ⅰ(AA-Ⅰ)引起的细胞增殖抑制作用.方法:以体外培养的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)为研究对象,在正常培养组(对照组)、AA-Ⅰ(10 mg·L-1)刺激组(AA组)和不同时机加入EGF处理组之间比较各项指标变化;用倒置显微镜对细胞形态进行观察;台盼蓝染色后细胞计数法观察细胞增殖反应;流式细胞仪分析细胞周期变化情况.结果:与对照组相比,AA-Ⅰ对细胞的毒性作用呈浓度和时间依赖性增强,AA-Ⅰ(10 mg·L-1)刺激24,48 h后对存活细胞的细胞周期分析可见G0/G1期细胞比例分别减少31.4%和87.4%,而G2/M期细胞比例逐渐增高达对照的1.32倍和3.73倍(均P＜0.05).EGF(20μg·L-1)刺激24 h后细胞数达对照组的1.36倍(P＜0.05),细胞周期中G0/G1期细胞比例减少9.7%,S和G2/M期细胞比例分别增高2.9%和6.7%,表明EGF具有促进细胞周期的作用.与AA-Ⅰ组相比,无论预先(preECF)、同时(EGF)或刺激后(postEEGF)加入EGF,AA-Ⅰ所致的细胞增殖抑制现象并没有得到改善,也未能明显改善其导致的细胞周期异常.结论:AA-Ⅰ(10 mg·L-1)能够显著抑制损伤后存活HK-2细胞的增殖,使细胞周期阻滞于G2/M期;外源性EGF(20μg·L-1)能够明显促进正常细胞增殖,但不同时机加入EGF均不能改善AA-Ⅰ所致的细胞增殖抑制作用.
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刺激物洗脱对马兜铃酸-Ⅰ所致肾小管上皮细胞增殖抑制作用的影响
目的 以体外培养的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)为研究对象,探讨刺激物马兜铃酸-Ⅰ被洗脱(aristolochic acid-Ⅰ,AA-Ⅰ)后对HK-2细胞增殖抑制作用的影响.方法 以AA-Ⅰ分别刺激细胞12、24、48h后去除刺激物,加入Hank's液对细胞进行重复3次洗涤,继续培养24h后测定各项指标.台盘兰染色后细胞计数法观察存活细胞增殖反应;流式细胞仪分析细胞周期变化情况.结果 应用AA-Ⅰ(10 μg/ml)刺激HK-2细胞后,随着刺激时间的延长存活细胞数量逐渐减少,12、24、48h后存活细胞计数较对照组分别下降8%、25%和57%;细胞周期测定结果显示AA-Ⅰ刺激HK-2细胞后,G2/M期细胞比例逐渐增高,到24h后G2/M期比例达对照组的1.28倍,48h后达正常对照组的3.8倍.以上情况在洗脱以后并没有得到改善,表现为洗脱后的12、24、48h组细胞数较相应时间点的刺激组分别下降45%、32%和30%;AA的G2/M阻滞作用在洗脱以后也没有好转,洗脱24h组G2/M比例达AA24h组的2.91倍,而与AA48h组差异无显著性.结论 AA-Ⅰ(10 μg/mi)能够显著抑制HK-2细胞的增殖,表现为细胞数目减少,细胞周期阻滞于G2/M期.洗脱细胞外的AA-Ⅰ后并未能改善AA-Ⅰ刺激导致的细胞增殖抑制作用,提示细胞内蓄积的AA-Ⅰ或其代谢物可能是导致细胞持续损伤的主要原因.
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马兜铃酸-Ⅰ在大鼠体内的毒代动力学及组织分布研究
目的:从毒代动力学的角度探讨马兜铃酸-Ⅰ(AA-Ⅰ)的肾毒性机制.方法:将中药广防已提取物(含AA-Ⅰ 80.5%)以125、62.5、15.2 mg/kg的剂量单次给予雄性Wistar大鼠灌胃,按规定时间采集大鼠血浆、胆汁、尿、粪便及组织样品,用高效液相紫外检测(HPLC)法,测定样品中AA-Ⅰ及其代谢物马兜铃内酰胺-1(AL-Ⅰ)的浓度.同时监测大鼠肾功能及肾组织形态学变化.结果:毒性剂量下的AA-Ⅰ的代谢符合血管外给药二室开放模型.大、中剂量组的主要代谢参数如下:分布相半衰期(T1/2α)分别为1.03和0.45 h,消除相半衰期(T1/2β)分别为6.10和6.54 h,清除率(CL)分别为3.02和1.41 ml/(min·kg),药时曲线下面积(AUC)分别为33.10和35.22μg/(ml·h),达峰时间(Tpeak)分别为0.62和1.35 h.AA-Ⅰ及AL-Ⅰ的组织分布范围较广,且蓄积程度较高.与空白对照组比较,中、大剂量组大鼠给药后血清Cr、BUN明显升高(P＜0.01).组织病理学检查结果显示,大剂量组大鼠肾小球包氏囊内新月体形成,肾小管坏死、消失.结论:毒性剂量下的广防已提取物在大鼠体内的代谢符合血管外给药二室开放模型,AA-Ⅰ及AL-Ⅰ的组织分布较广泛,其蓄积具有特异性.大鼠肾损害的程度与肾脏中AL-Ⅰ浓度相关.
