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中药组分HJJB方对非酒精性脂肪肝大鼠PP1-DNA-PK-USF1信号通路的干预作用
目的:基于蛋白磷酸酶(PP1)-DNA依赖的蛋白激酶(DNA-PK)-上游刺激因子1(USF1)信号通路,探讨中药组分HJJB方防治非酒精性脂肪肝(NAFLD)的作用机制.方法:采用高脂饮食诱导的大鼠NAFLD模型.设模型组、HJJB方组和罗格列酮组,分别灌胃给药6周.HE染色观察肝组织病理变化;测定肝组织甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)含量的变化;肝组织PP1、DNA-PK、USF1 mRNA水平和蛋白含量的变化.结果:模型组肝组织出现显著的肝细胞脂肪变性及空泡样变,肝组织TG、FFA含量较正常组显著升高(P＜0.01),肝组织PP1、DNA-PK、USF1 mRNA水平和蛋白含量较正常组均明显升高(P＜0.01).HJJB方组的上述病理改变明显减轻,肝组织TG、FFA含量较模型组显著降低(P＜0.01),肝组织PP1、DNA-PK、USF1 mRNA水平和蛋白含量较模型组显著降低(P＜0.01).结论:HJJB方能显著降低脂肪肝大鼠肝组织PP1 mRNA水平和蛋白含量,进而抑制其下游信号通路,这可能是其防治NAFLD的重要机制.
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DNA依赖的蛋白激酶和检查点激酶1对卵巢癌细胞周期阻滞的研究
目的:探讨DNA-PK和CHK1对卵巢癌Skov3的细胞周期阻滞的机制.方法:通过对DNA-PK shRNA和CHK1 shRNA的构建及有效干扰载体的筛选,流式细胞仪检测G2期.结果:转染DNA-PK shRNA的Skov3细胞和Hela细胞经2Gy X射线照射后进入G2期的细胞比率无差异;转染CHK1 shRNA的Skov3细胞经2Gy X射线照射后4h进入G2期的细胞比率显著高于Hela细胞(t=2.618,P=0.026),28h时明显低于Hela细胞(t=2.705,P=0.022);转染DNA-PK shRNA和CHK1 shRNA的Skov3细胞经2Gy X射线照射后4h进入G2期的细胞比率显著高于Hela细胞(t=2.965,P=0.014),28h时明显低于Hela细胞(t=2.302,P=0.044).结论:干扰DNA-PK和CHK1的表达可增强卵巢癌细胞对辐射的敏感性.
关键词： 辐射敏感性 卵巢癌 DNA依赖的蛋白激酶 检查点激酶1 -
DNA-PKcs 介导多药耐药恶性胶质瘤细胞化疗抗性及分子机制
目的：观察 DNA 依赖的蛋白激酶的催化亚单位（DNA-PKcs）对多药耐药的恶性胶质瘤细胞化疗抗性的影响，探讨其介导化疗抗性的分子机制。方法：采用 siRNA 技术构建 DNA-PKcs 基因表达沉默的人胶质瘤U251细胞株；采用 Western blotting 法检测 U251细胞（U251细胞）、多柔比星（ADM）耐药的 U251细胞（U251／ADM 细胞）和 DNA-PKcs 基因表达沉默的多柔比星耐药的 U251细胞（U251／ADM／siDNA-PKcs 细胞）中 DNA-PKcs 蛋白表达水平；采用 CCK8法检测3组细胞增殖活性；采用 Western blotting 法检测3组细胞中多药耐药性1（MDR1）、报告基因质粒 pNF-κB／p6、总 Akt 蛋白、pAkt／T308和 pAKT／S473蛋白表达水平。结果：U251／ADM细胞 DNA-PKcs 蛋白表达水平 明 显 高 于 U251细胞 和 U251／ADM／siDNA-PKcs 细胞（P ＜0.01）；ADM、紫杉醇（PTX）和吉西他滨（GEM）对 U251／ADM／siDNA-PKcs 细胞的半数抑制浓度（IC50）值较 U251／ADM 细胞明显降低（P ＜0.01）；U251／ADM／SIDNA-PKcs 细胞中 pAKT／S473、 pNF-κB／p65和MDR1蛋白表达水平均明显低于 U251／ADM 细胞（P ＜0.05），而两者总 Akt 和 pAkt／T308蛋白表达水平比较差异无统计学意义（P ＞0.05）。结论：DNA-PKcs 能明显增强多重耐药的恶性胶质瘤细胞化疗抗性，其作用机制与 pAKT／S473和 pNF-κB／p65表达上调，诱导 MDR1表达有关。
关键词： DNA依赖的蛋白激酶 胶质瘤 化疗抗性 多药耐药蛋白1 -
DNA-PK的活性与鼻咽癌细胞株CNE1/CNE2放射敏感性的关系
本文主要研究DNA依赖的蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase,DNA-PK)与鼻咽癌细胞放射敏感性之间的关系.克隆形成实验分析鼻咽癌细胞CNE1/CNE2的剂量存活曲线,Signa TECT DNA-PK试剂盒检测DNA-PK活性,免疫荧光及激光显微共聚焦分析放疗前及放疗后15 min、1 h、6 h、12 h和24 h CNE1/CNE2细胞中Kus及DNA-PKcs的亚细胞定位,Western blot分析两株细胞中Kus蛋白的表达.结果显示:CNE1细胞在每个剂量点的存活分数均高于CNE2细胞;同时发现放疗前后CNE1细胞中的DNA-PK活性也均高于CNE2细胞,但两株细胞中Ku70/Ku80蛋白表达无明显差异;放疗可使DNA-PK活性增加,且各个检测时间点CNE1细胞增加的幅度大于CNE2细胞;DNA-PK亚基可同时定位于胞浆和胞核,但主要位于胞核,细胞照射后Ku70、Ku80和DNA-PKcs从胞浆转运到胞核.结果表明:DNA-PK活性更高可能是CNE1细胞较CNE2细胞更能抵抗放射的原因之一;放疗所致DNA-PK活性增高可能与DNA-PK亚基从胞浆转运到胞核有关,而与Ku蛋白表达的总量无关.
关键词： 鼻咽癌 CNE1/CNE2 放射敏感性 DNA依赖的蛋白激酶 -
低剂量放射超敏感性和放射拒抗与DNA依赖蛋白激酶的表达
低剂量放射超敏感性是近十几年来研究的热点课题之一.是继放射敏感性之后的又一重大发现,是对传统放射生物学的一个有益补充和发展.有助于解决肿瘤细胞的放射耐受和正常组织的放射损伤问题.对放射治疗分割方法的设计、物理计划设计和生物学优化都具有重要指导意义.低剂量放射超敏感性主要包括放射超敏感期和放射拒抗期.放射超敏感期与细胞凋亡密切相关,放射拒抗期主要以DNA损伤修复后非同源末端连接相关,DNA-PK(DNA-PKcs、Ku70、Ku80)等蛋白参与DNA非同源末端连接,在超敏中具有重要作用.本文对DNA-PK在低剂量超敏感性中的作用做一综述.
