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Mas相关G蛋白偶联受体C参与电针干预慢性炎性痛及其外周δ-阿片受体机制
目的:观察电针(EA)干预完全弗氏佐剂(CFA)所致慢性炎性痛的镇痛效应并探讨Mas相关G蛋白偶联受体C(MrgprC)参与EA调制背根神经节(DRG)δ-阿片受体(DOR)的机制.方法:选取健康雄性SD大鼠80只.鞘内置管成功的40只大鼠按照随机区组法分为电针+ MrgprC小干扰RNA组、电针+对照小干扰RNA组、模型组、正常组、牛肾上腺髓质8-22肽组,每组8只.大鼠右后足底注射CFA 0.lmL以建立慢性炎性痛模型,分别测量CFA造模后1、2、3、4、5、6d大鼠热辐射撤足潜伏期(TWL).采用免疫印迹法检测大鼠患侧DRG中DOR总蛋白表达和膜/浆比值,采用免疫荧光法检测大鼠患侧DRG中DOR阳性细胞表达率.结果:与正常组比较,CFA模后ld各组大鼠患侧痛阈显著降低(P＜0.01).与模型组比较,电针+对照小于扰RNA组、电针+MrgC小干扰RNA组、牛肾上腺髓质8-22肽组自CFA造模后3d起痛阈均显著上升(P＜0.01).CFA造模后5d、6d时,电针+对照小干扰RNA组痛阈明显高于同时点的电针+MrgprC小干扰RNA组(P＜0.01,P＜0.05).与电针+对照小干扰RNA组比较,牛肾上腺髓质8-22肽组在CFA造模后2d鞘内给予BAM8-22后出现痛阈明显升高(P＜0.01).与模型组比较,电针+对照小干扰RNA组患侧DRG中DOR总蛋白表达、DOR膜/浆比值和DOR阳性细胞表达率均上升(P＜0.05,P＜0.01).与电针+对照小干扰RNA组比较,电针+MrgC小干扰RNA组患侧DRG中DOR总蛋白表达、DOR膜/浆比值和DOR阳性细胞表达率显著下降(P＜0.05,P＜0.01).结论:MrgprC参与EA对CFA诱导的慢性炎性痛的外周镇痛作用,其机制可能与MrgprC调节患侧DRG中DOR表达及膜转移相关.
关键词： 电针 慢性炎性痛 背根神经节 Mas相关G蛋白偶联受体C δ-阿片受体 -
NO-cGMP信号转导系统的上调参与阿片类药物耐受和戒断的生化机制
目的观察阿片激动剂长时程作用对NO-cGMP信号转导系统的影响.方法选用iNOS cDNA稳定表达的NG-LNCXiNOS细胞,采用NOS活性和cGMP放免测定,Western杂交和NADPH黄递酶组化染色技术.结果阿片类药物长时程作用剂量依赖性增高胞浆相iNOS活性和胞内cGMP含量,药物作用强弱顺序是DPDPE> DADLE>吗啡,EC50都在nmol·L-1数量级.用纳洛酮急性戒断阿片耐受细胞,造成酶活性和cGMP水平增加更显著.DPDPE长时程作用还引起iNOS基因表达增强和NADPH黄递酶染色阳性细胞增多.结论提示NO-cGMP信号转导系统上调可能是阿片耐受和成瘾的重要生化改变.
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阿片类药物对诱导型NO合酶稳定表达神经细胞受体介导AC-cAMP系统的影响
目的:利用稳定表达诱导型NO合酶的NG-LNCXiNOS细胞,观察阿片类药物对受体介导AC-cAMP系统的影响.方法:竞争性蛋白结合法和完整细胞受体结合实验测定cAMP含量和受体结合力.结果:阿片类药物短时程作用抑制AC活性,受阿片受体介导的、百日咳毒素敏感的G蛋白信号通路调节.阿片类药物长时程作用和纳洛酮急性戒断引起受体脱敏,呈时间和剂量依赖性,伴有受体下调.结论:成功地建立阿片耐受和依赖细胞模型,可用于研究AC-cAMP系统和NO-cGMP系统在阿片耐受和成瘾中的调节.
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大鼠脑内δ-阿片受体在累加电针抗缺血性脑损伤中的作用
目的 探讨δ-阿片受体(DOR)在累加电针抗脑缺血损伤中的作用.方法 大鼠随机分为7组:假手术组、单纯脑缺血组、脑缺血+电针组、脑缺血+假电针组、脑缺血+TAN-67(DOR激动剂)组、脑缺血+nahrindole(DOR拮抗剂)组、脑缺血+nahrindole+电针组.除假手术组外,其余各组均用大脑中动脉线栓法致大鼠局部脑缺血再灌注,缺血1 h再灌7 d.于缺血前30 min及再灌第2、4、5、6、7天,侧脑室注射nahrindole或TAN-67;于再灌开始及第2、4、5、6、7天,电针"水沟"和"内关"穴30 min.再灌后24 h评测神经功能缺损程度,再灌第7天后检测脑梗死体积.结果 脑缺血+电针组或脑缺血+TAN-67组与单纯脑缺血组相比梗死体积减小、神经功能缺损减轻(P<0.05);脑缺血+nahrindole组与单纯脑缺血组相比梗死体积增大、神经功能缺损加剧(P<0.05);脑缺血+nahrindole+电针组与累加电针组相比,梗死体积增大、神经功能缺损评分加剧(P<0.05):假电针组与单纯脑缺血组相比梗死体积、神经功能缺损评分无显著性差异(P>0.05).结论 DOR拮抗剂naltrindole能够翻转累加电针对缺血,再灌大鼠的神经保护作用,提示其活动可能是累加电针抗脑缺血损伤中的重要机制.
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δ-opioid Receptor Induced Inhibition of Sodium Channel Function
目的:研究δ-阿片受体表达和激活对钠通道1.2亚型的电流特性的影响.方法:用双电极电压钳技术,在δ-阿片受体和钠通道亚型1.2共表达的非洲爪蟾第V期卵母细胞上,观察δ-阿片受体表达和/或激活后,钠通道1.2亚型电流特性的变化.结果:1)钠通道1.2亚型的表达产生河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)敏感的内向电流;2)δ-阿片受体的表达减少钠通道激活电流的幅度;3)δ-阿片受体和钠通道1.2亚型共表达的卵母细胞中,δ-阿片受体激动剂可以抑制钠通道激活电流的幅度和电导,而只有钠通道1.2亚型表达的卵母细胞则无此现象;4)δ-阿片受体激动剂抑制钠电流的作用具有剂量依赖关系,并能达到饱和状态;5)δ-阿片受体激动剂对未表达外派陛蛋白的卵母细胞无影响.结论:本结果首次以直接证据证明了δ-阿片受体可以抑制钠通道的兴奋性和降低钠电流的幅度.这一发现对缺血/缺氧性神经元损伤、癫痫、疼痛等神经机能障碍的解决具有深远意义,并有助于深入揭示针刺治疗脑疾病的内在机制.
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激活δ-阿片受体可对抗原代培养神经元氧糖剥夺损伤
目的 研究皮层δ-阿片受体(δ-opioid receptor,DOR)的抗神经元氧糖剥夺损伤作用.方法 采用原代培养胎鼠皮层神经元氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)模型,分别加入DOR选择性激动剂TAN一67、拮抗剂nahrindole及PKC抑制剂chelerythrine(CHE),检测再灌注后培液中LDH水平、进行死/活细胞染色,并利用Western blot检测再灌注24 h后DOR蛋白表达水平.结果 与单纯OGD组相比,OGD+TAN-67组培液中的LDH水平明显下降,荧光染色显示活细胞增加死细胞减少,且DOR蛋白表达增加;OGD+naltrindole组则细胞受损加重.且DOR蛋白表达减少.PKC抑制剂CHE能抑制DOR激活后培液中LDH水平的下调.结论 DOR激动剂可以抗神经元氧糖剥夺损伤.拮抗DOR则加重该损伤.PKC可能参与了DOR的神经保护作用.
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大鼠侧脑室注射δ-阿片受体拮抗剂naltrindole或激动剂TAN-67对急性脑缺血的影响
本文旨在探讨δ-阿片受体(δ-opioid receptor,DOR)在急性脑缺血/再灌注损伤中的作用.除假手术组外,其余各组均用大脑中动脉线栓法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)制备大鼠右侧局灶性缺血/再灌注模型,缺血1 h再灌注24 h.于缺血前30 min侧脑室分别注射DOR拮抗剂naltrindole(20 nmol,50 nmol,100 nmol)、激动剂TAN-67(30 nmol,60nmol,200 nmol)或人工脑脊液,用Longa 5分制评分标准对大鼠进行神经功能评分,焦油紫(cresyl violet,CV)染色和图像分析处理系统测量梗死灶大小,Western blot检测纹状体DOR蛋白的表达.结果表明,60 nmol TAN-67显著减小梗死体积(P<0.05),提高神经功能缺损评分(P<0.05),约60 kDa的DOR蛋白表达也倾向于上升(P>0.05);100 nmol的naltrindole加重脑缺血损伤,约60 kDa的DOR蛋白表达下降(P<0.05).上述结果提示,激动DOR对急性缺血,再灌注大鼠的脑损伤有保护作用,而阻断DOR则加重其损伤.
关键词： 脑缺血 δ-阿片受体 TAN-67 naltrindole 大脑中动脉栓塞 -
δ-阿片受体抑制阿片诱发痛觉过敏的研究进展
背景 阿片类药物是治疗中、重度疼痛的主要药物,长时间应用可出现阿片诱发的痛觉过敏和耐受,而增加药物剂量可造成更严重的痛觉过敏和耐受,从而形成恶性循环,很大程度上限制了阿片类药物在临床工作中的应用.目的 通过对近年δ-阿片受体在痛觉过敏中所起作用的研究进行总结,帮助读者了解国外相关研究的新趋势和进展.内容 就δ-阿片受体的结构、分布、生理功能和δ-阿片受体的抗痛觉过敏作用的研究进展进行综述.得出如下结论,通过抑制δ-阿片受体磷酸化、敲除δ-阿片受体编码基因和应用δ-阿片受体拮抗剂等方法,可抑制痛觉过敏和耐受的形成.趋向 随着越来越多的学者对δ-阿片受体抑制痛觉过敏的作用达成共识,δ-阿片受体有望成为临床疼痛治疗的新靶点.
