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青钱柳总皂苷对游离脂肪酸诱导的H4-Ⅱ E细胞脂肪代谢的影响及作用机制
目的:研究青钱柳总皂苷(CPS)对游离脂肪酸(FFA)诱导的H4-Ⅱ E肝细胞脂肪代谢的影响和作用机制.方法:以FFA诱导的H4-Ⅱ E大鼠肝细胞为模型,培养72 h后,采用Neutral red法检测CPS(0,0.05,0.10,0.20,0.40 g·L-1)对细胞活性的影响;根据细胞活性检测结果选择CPS低剂量组(CPS-L,0.10 g·L-1)和高剂量组(CPS-H,0.20 g·L-1)干预,油红0(Oile red)染色并测定细胞内脂质含量;药物干预2h后实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测肝细胞相应基因表达,药物干预30 min后,利用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞相应蛋白磷酸化水平.结果:与正常组比较,0.10,0.20 g·L-1 CPS干预后肝细胞活性明显升高(P＜0.05);干预72 h后,Oile red染色显示FFA(20 μmol·L-)诱导后呈现大片红染的脂滴,细胞脂质含量显著增加(P＜0.01),CPS干预后细胞中红染的脂滴减少,细胞脂质含量较FFA (20 μmol.L-1)诱导组明显减少(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,CPS-L和CPS-H组腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK),乙酰CoA羧化酶(ACC)蛋白磷酸化水平明显升高(P ＜0.05,P＜0.01);胆固醇应答元件结合蛋白1c(SREBP1c),脂肪酸合成酶(FAS) mRNA表达水乎明显降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:CPS能够显著降低体外FFA诱导肝细胞脂质沉积,可能是通过上调AMPK,ACC蛋白磷酸化水平,下调SREBP1c,FAS mRNA表达而发挥作用.
