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睿臻对肺癌的抑制作用及其机制
目的:初步探讨由山楂、沙棘和枸杞三味中药为主,并添加虫草素、虫草多糖、β－葡聚糖和番茄红素等制备而成的天然药物组方睿臻的体内外抗肺癌活性及其机制.方法:采用MTT法检测睿臻体外抗肿瘤活性,小鼠Lewis移植瘤模型观察单独使用睿臻及联合紫素的抗肺癌活性及对荷瘤小鼠生存时间的影响. FCM实验检测其对肿瘤细胞凋亡的影响,重组基质膜侵袭实验观察对肿瘤细胞侵袭能力的影响,Western blot方法初步探讨该化合物的作用机制.结果:睿臻对肺癌细胞具有较好的增殖抑制活性,其作用于A549 细胞株、NCI－H460 细胞株和NCI－H1975细胞株120 h后的IC50值分别为98.42 μg/mL、60.02 μg／mL和60.41 μg／mL;睿臻也可显著抑制小鼠Lewis肺癌的生长,9.0 g／kg睿臻对小鼠Lewis肺癌的生长抑制率达70.0%,且可在增强紫素的抗肿瘤活性的同时升高胸腺指数及外周血中红细胞数量和血红蛋白水平.睿臻可延长Lewis肺癌小鼠的生存时间.睿臻可诱导肺癌细胞A549和NCI－H460发生凋亡.在96.0 μg／mL和192.0 μg／mL剂量下,可显著抑制肺癌细胞穿过重组基底膜的数量. Western blot 结果显示睿臻可抑制Raf／MEK／ERK、FAK／p38等信号通路.结论:睿臻在体内外均具有一定的抗肺癌活性,其作用机制可能与阻断Raf／MEK／ERK信号转导通路有关,有望开发成为肺癌治疗的天然药物制剂.
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复心合剂对心衰大鼠信号通路Raf-MEK-ERK的影响
目的:初步探索复心合剂对信号通路Raf-MEK-ERK的影响.方法:75只Wistar雄性大鼠,随机分为5组,对照组、卡托普利组、复心合剂低剂量组、复心合剂高剂量组均为15只.实验过程中阿霉素干预4周后测定大鼠心功能;6周后应用Western blot法检测大鼠心肌组织中Raf、MEK、ERK蛋白表达情况.结果:(1)与正常对照组比较,模型组大鼠BNP值显著升高(P＜0.01),心衰模型成功建立.(2)与正常对照组相比,模型组大鼠心肌组织Raf水平显著升高(P＜0.01),复心合剂高剂量组、卡托普利组大鼠心肌组织Raf水平显著降低(P＜0.01),与卡托普利组相比,复心汤高剂量组大鼠心肌组织Raf无统计学意义(P＞0.05).(3)与正常对照组相比,模型组大鼠心肌组织MEK水平显著升高(P＜0.01),复心合剂高剂量组、卡托普利组大鼠心肌组织MEK水平显著降低(P＜0.01).(4)与正常对照组相比,模型组大鼠心肌ERK蛋白表达明显升高(P＜0.01),卡托普利组及复心合剂高剂量组ERK蛋白表达无显著差异性(P＞0.05),与模型组相比,复心合剂高剂量组、卡托普利组大鼠心肌组织ERK水平显著降低(P＜0.01).结论:复心合剂对心衰大鼠信号通路RM-MEK-ERK的蛋白激活具有一定的抑制作用,延缓心衰进程.
关键词： 复心合剂 心力衰竭 信号通路 Raf/MEK/ERK -
异槲皮苷对HepG2细胞中Raf/MEK/ERK信号通路的干预作用
目的 研究异槲皮苷对HepG2细胞中Raf/MEK/ERK信号通路的干预作用.方法 采用异槲皮苷(0、40、80、160、320 μmol·L-1)作用于HepG2细胞,MTT法检测异槲皮苷对HepG2细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察24、48 h后,细胞形态及生长情况;流式细胞术检测异槲皮苷(0、40、80、160 μmol·L-1)作用HepG2细胞48 h后细胞周期情况;荧光定量PCR及Western blot检测异槲皮苷作用HepG2细胞后Ras、Raf、MEK、ERK mRNA及相关蛋白的表达.结果 MTT检测发现异槲皮苷对HepG2细胞生长有明显抑制作用,且与异槲皮苷的浓度及作用时间呈正相关;不同浓度的异槲皮苷作用HepG2细胞24、48 h后,倒置显微镜下观察发现随着浓度的增高及作用时间的延长,细胞生存数量逐渐减少,且细胞形态发生明显变化;流式细胞术检测发现随着异槲皮苷浓度的增高,细胞被阻滞在G1期的数量逐渐增加;荧光定量PCR及Western blot结果均表明,与空白组相比,异槲皮苷(80 μmol·L-1)作用HepG2细胞后Ras、Raf、MEK、ERK mRNA及其相关蛋白的表达均明显降低(P<0.05),差异有统计学意义.结论 异槲皮苷有诱导HepG2细胞凋亡的作用,其作用机制可能与对Raf/MEK/ERK信号通路中相关因子的干预有关.
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冬凌草甲素抗T细胞急性淋巴细胞白血病效应的实验研究
目的 探讨冬凌草甲素对T细胞急性淋巴细胞白血病的抗白血病效应及其机制.方法 以T细胞急性淋巴细胞白血病细胞株CEM为研究对象,应用改良MTT法测定不同浓度及不同时间冬凌草甲素对CEM细胞增殖和生存率的影响,计算72 h的半数抑制浓度(IC50);显微镜下观察5、7.5、10 μmol/L冬凌草甲素处理24 h后CEM细胞的形态学变化;流式细胞术检测0.5、7.5、10 μmol/L冬凌草甲素作用24 h后CEM细胞的凋亡百分率;应用Western blot法检测7.5 μmol/L冬凌草甲素作用后细胞mTOR、P70、4EBP1、RAF、ERK、STAT5信号蛋白水平,以及凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的变化.结果 ①冬凌草甲素呈浓度及时间依赖性抑制CEM细胞增殖,作用72 h的IC50值为(7.37±1.99)μmol/L;②5、7.5、10 μmol/L冬凌草甲素作用24 h后CEM细胞边界不清晰,部分细胞崩解,且浓度越高,细胞形态改变越明显;③0、5、7.5、10 μmol/L冬凌草甲素作用24 h后,细胞凋亡百分率分别为(4.8±2.11)％、(19.03±2.54)％、(40.27±3.31)％;(57.23±6.69)％;④冬凌草甲素明显抑制CEM细胞mTOR、P70、4EBP1、RAF、ERK、STAT5信号蛋白的活化;下调CEM细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调促凋亡蛋白Bax的表达.结论 冬凌草甲素可能通过抑制mTOR/P70(4EBP1)、RAF/ERK、STAT5信号蛋白的活化,以及上调促凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2而发挥抗白血病作用.
