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基于ITS2序列的禹州漏芦和漏芦药材基因识别
目的:应用ITS2序列鉴别禹州漏芦和漏芦药材的真伪,为临床准确用药提供可靠的基因识别方法.方法:收集多基原药材禹州漏芦基原物种蓝刺头和华东蓝刺头共14份样品和漏芦药材基原物种祁州漏芦8份样品,经实验获取ITS2序列,结合GenBank中20条相关近缘混伪品序列,建立以上物种和混伪品的DNA条形码鉴定方法;将从市场上收集的1 1份禹州漏芦和20份漏芦药材的ITS2序列与以上序列进行比对分析和构建系统NJ树.结果:禹州漏芦两个基原物种的序列主导单倍型相同;禹州漏芦和漏芦药材基原物种大K2P距离均小于其与混伪品的种间小K2P距离;系统NJ树分析均能准确区分禹州漏芦和漏芦药材与各自混伪品.药材检测结果表明,1 1份禹州漏芦中10份为正品,1份为伪品;20份漏芦中2份为正品,18份为伪品.结论:本研究建立了基于ITS2序列的禹州漏芦和漏芦药材DNA条形码鉴定方法,可用于快速鉴别禹州漏芦和漏芦药材真伪.
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ITS2序列鉴定“功劳叶”药材及其近缘混伪品＊
目的：中药材同名异物现象对临床安全用药造成了潜在的威胁。本研究对两种“功劳叶”药材及其近缘混伪品进行分子鉴定，以确保临床准确用药。方法：本实验收集枸骨、阔叶十大功劳和细叶十大功劳及其近缘混伪品共9个物种45份实验样品，用改良的CTAB法提取总DNA ，扩增ITS2序列并双向测序，采用CondonCode Aligner V 4.2.4对测序峰图进行拼接，应用MEGA 6.0进行序列变异分析，计算种内种间Kimura 2-Parameter（K2P）遗传距离，构建系统邻接（NJ）树。结果：基于ITS2序列的序列变异、近距离法和系统邻接树分析结果均表明，冬青属枸骨以及十大功劳属阔叶十大功劳和细叶十大功劳均能与其混伪品很好地区分开。结论：ITS2序列可有效区分两种“功劳叶”药材及其近缘混伪品，为临床准确用药提供依据。
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ITS2序列鉴定大蓟、小蓟药材及其近缘混伪品
目的:应用ITS2序列鉴别大蓟、小蓟药材及其近缘混伪品,以保障临床用药准确.方法:收集大蓟、小蓟药材的基原物种蓟和刺儿菜及其近缘混伪品,经DNA提取、PCR扩增、测序和序列拼接等步骤,获得ITS2序列,结合GenBank载序列共14个物种54条序列,用MEGA6.0对序列进行比对分析,计算种内种间K2P(Kimura 2-Parameter)遗传距离,构建系统邻接(NJ)树.结果:ITS2序列分析表明,蓟和刺儿菜种内变异位点数均远小于其与混伪品种间变异位点,以上2个物种种内大(平均)K2P距离均小于其与混伪品种间小(平均)K2P距离;基于ITS2序列的系统NJ树可以将蓟和刺儿菜及其近缘混伪品很好地区分开,且各物种均单独成支.结论:ITS2序列可以很好地鉴定大蓟、小蓟药材及其近缘混伪品.
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ITS2序列鉴定多基原药材老鹳草
目的 应用ITS2序列检测市场收集的多基原药材老鹳草,为规范药材市场管理提供分子依据.方法 收集多基原药材老鹳草的基原物种栊牛儿苗、老鹳草和野老鹳草及其近缘混伪品,通过实验获取其ITS2序列,结合GenBank下载的序列共计28个物种82条序列,进行序列比对验证、近距离法和系统邻接(NJ)树分析,建立基于ITS2序列的老鹳草药材DNA条形码鉴定技术方法;运用该方法检测市场随机收集的18份老鹳草药材样品,经序列比对结合以上方法建立的系统邻接(NJ)树确定其物种基原,以判定其市场真伪.结果 ITS2序列能将老鹳草药材的3个基原物种及其近缘混伪品很好地区分开;18份市场收集的老鹳草药材ITS2序列鉴定结果表明,其中16份为正品,2份为混伪品.结论 该研究建立了基于ITS2序列的多基原药材老鹳草DNA条形码鉴定技术方法,实现了对市场随机收集的老鹳草药材物种基原的真伪判定,为多基原药材鉴定难题提供了参考方法.
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ITS2+psbA-trnH复合序列鉴定徐长卿、白薇和白前
目的:建立以ITS2+ psbA-trnH复合序列鉴定徐长卿、白薇和白前及其同属近缘混伪品的DNA条形码鉴定方法.方法:搜集徐长卿、白薇、白前及其近源混伪品,采用改良的CTAB法提取DNA,通过实验分别获得ITS2和psbA-trnH序列,将同一样本的ITS2序列与psbA-trnH序列整合得到43条ITS2+ psbA-tmH复合序列,从GenBank数据库中下载来源于同一样本的ITS2序列与psbA-trnH序列整合得到14条ITS2+ psbA-trnH网上复合序列,用MEGA 6.05软件分析徐长卿、白薇、白前及其近源混伪品的复合序列变异位点,计算种内、种间的K2P距离,并构建YJ系统聚类树.结果:徐长卿、白薇和白前药材ITS2+ psbA-trnH复合序列比对后产生17个变异住点;徐长卿、白薇和白前基源物种种内大K2P距离均小于其与混伪品的种间小K2P距离;系统NJ树能准确将徐长卿白薇和白前及其近缘混伪品.结论:该研究建立了应用ITS2+ps-bA-trnH复合序列鉴定徐长卿、白薇、白前及其近缘混伪品的DNA条形码鉴定方法.
关键词： 徐长卿 白薇 白前 ITS2+ psbA-trnH复合序列 近缘混伪品
