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5例HBV前C区1896位点和／或BCP1762、1764位点变异对聚乙二醇干扰素α2a早期应答的影响
目的：探讨 HBV 前 C 区1896位点和／或 BCP1762、1764位点变异对聚乙二醇干扰素α2a 早期应答的影响。方法选择5例 HBV PC1896和／或 BCP1762、1764位点发生变异的慢性乙型肝炎患者，使用聚乙二醇干扰素α2a 和／或核苷酸类似物抗病毒治疗，观察患者治疗12周、24周、48周时 HBsAg、HBeAg、HBV DNA、ALT 的变化。结果5例患者使用聚乙 二 醇 干 扰 素α2a 和／或核苷酸类似物抗病毒治疗后12周、24周 均 发 生 了 应 答。结论 HBV PC1896和／或BCP1762、1764位点发生变异作为亚洲人群聚乙二醇干扰素α2a 治疗取得早期应答的预测因素。
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乙型肝炎病毒基本核心启动子突变与基因型的关系
目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子(BCP)突变与HBV基因型的关系.方法 随机选取我院68例慢性乙型肝炎患者外周血,采用荧光定量PCR结合Taqman MGB探针技术检测HBV基因型,并用基因扩增和DNA测序方法检测BCPT 1762/A1764双突变.结果 68例患者HBV分型中,B基因型20例,c基因型46例,B、C混合型1例,未分型(非B非C型)1例.66例B、C两基因型中,B基因型组T1762/A1764双突变5例,突变率25.0%(5/20),C基因型组T1762/A1764双突变24例,突变率52.2%(24/46),C基因型T1762/A1764双突变率明显高于B基因型(P＜0.05).结论 苏州地区慢性乙型肝炎患者基因型以C型和B型为主,C基因型比B基因型更易发生T1762/A1764双突变.
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乙型肝炎病毒基因型对乙型肝炎病毒变异的影响
目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因型对病毒前核心区(前C区,nt1896)及基本核心启动子(BCP,nt1762/1764)变异的影响.方法416例血清HBsAg阳性、HBV DNA定量大于1.0×104拷贝/ml的患者,采用微流基因芯片检测HBV基因型、前C区及BCP变异.结果416例HBV感染者中406例有基因分型结果:B型20.9%、C型65.9%、BC混合型10.8%,10例患者未分出基因型.302例为HBeAg(-)且HBV DNA(+)患者,其中248例(82.12%)有前C区或BCP变异,41.06%为前C区变异,31.12%BCP变异,2种同时变异为9.94%.B型患者前C区变异率为22.9%(20/87),与C型患者前C区变异率39.4%(108/274)及B、C混合型变异率40.0%相比均有显著差异(P＜0.01).在BCP变异及双变异,C型患者变异率均大于B型患者,但差异无统计学意义(P＞0.05).B、C混合型患者前C区及BCP变异率与C型相似.结论HBV基因型可影响病毒前C区及BCP变异,以C型为著.
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慢性乙型肝炎病毒感染者病毒前C区和基本核心启动子区变异检测及意义
目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前C区和基本核心启动子(BCP)区变异与基因型及疾病进展间的关系.方法收集HBV携带者(ASC)、慢性乙型肝炎(CHB)、肝炎肝硬化(LC)、肝细胞肝癌(HCC)患者血清148份,用半巢式聚合酶链反应扩增HBV前C/C基因部分片段,产物纯化后直接测序,检测前C区A1896及BCP区T1762/A1764变异.用S基因聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法确定HBV基因型.结果有128份血清能够成功分型和测序,其中B基因型60份,C基因型68份.在B基因型感染者中前C区A1896变异检出率(48.33%)明显高于C基因型感染者(29.41%,χ2=4.83,P＜0.05);而BCP区T1762/A1764变异检出率却明显低于C基因型感染者,差异亦有统计学意义(30.00%:73.54%,χ2=24.25,P＜0.05).前C区A1896变异在CHB、LC、HCC中的阳性检出率分别为46.88%(15/32)、39.39%(13/33)、51.52%(17/33),与ASC的13.33%(4/30)相比,P分别＜0.05,差异有统计学意义.BCP区T1762/A1764变异检出率在HCC、LC组分别为87.88%(29/33)和72.73%(24/33),明显高于CHB组的37.50%(12/32)及ASC组10.00%(3/30)(P＜0.05).结论前C区A1896变异常见于B基因型感染者,而BCP区T1 762/A1764变异C基因型感染者多见.除ASC外,前C区A1896变异与疾病进展关系不大,而BCP区T1762/A1 764变异与乙型肝炎进展及预后相关.
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乙型肝炎病毒基本核心启动子区A1762T/G1764A双突变复制质粒的构建
目的:构建乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基本核心启动子(base core promoter,BCP)区A1762T/G1764A双突变株的复制质粒.方法:以1.5拷贝HBV野生型全基因组序列质粒(pHBV1.5,C型)为模板,采用分子克隆、大引物PCR定点诱导突变和遗传检测法等技术,筛选出阳性克隆,提取突变质粒,经DNA测序鉴定质粒序列的正确性.将突变质粒转染到人肝癌HepG2.0细胞,测定细胞培养液HBV DNA载量和HBsAg水平来鉴定突变质粒的复制能力.结果:成功构建BCP区A1762T/G1764A双突变复制质粒,经转染人肝癌HepG2.0细胞培养后测定HBV DNA水平,双突变株复制能力高于野生株[分别为(3.29±1.27)×105拷贝/ml和(1.24±0.24)×105拷贝/ml,P =0.01].结论:获得BCP区A1762T/G1764A双突变株质粒,为进一步研究启动子转录活性等基础性研究提供了基本模型.
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慢性乙型肝炎和肝细胞癌患者乙肝病毒BCP区1762/1764双突变的定量检测及其意义
目的:观察乙型肝炎病毒基本核心启动子(basic core promoter,BCP)区1762/1764双突变和肝细胞癌发病间的关系及意义.方法:利用已构建的乙肝病毒BCP区A1762T/G1764A双突变复制质粒,设计特异性TaqMan MGB探针,采用特异性探针实时荧光定量PCR(PSRT-PCR)方法对从未进行过抗病毒治疗的80例慢性乙肝患者和50例已发生肝癌的慢性乙肝患者患者分别予以血清和肝组织双突变定量检测,比较双突变在这两类患者血清和肝组织中的发生情况.结果:慢性乙型肝炎患者组血清突变率为41.25%(33/80),肝组织突变率为45.00%(36/80);肝细胞癌组血清突变率为68.00%(34/50),肝组织突变率为78.00%(39/50),两组间的差异有统计学意义(P＜0.005).每组各自血清突变率和肝组织突变率无明显差异.乙肝组中高病毒载量患者(HBV DNA≥106/ml,43例)血清和肝组织的突变率分别为58.14%(25/43)、62.79%(27/43),低病毒载量患者(HBV DNA＜106/ml,37例)血清和肝组织突变率分别为21.62%(8/37)、24.32%(9/37).高病毒载量患者血清及肝组织双突变率明显高于低病毒载量组(P均＜0.01).结论:已发生肝癌的慢性乙肝患者BCP区双突变发生率明显高于未发生肝癌者,提示此双突变和肝癌的发生密切相关,检测此双突变有助于预测肝癌的发生;且血清检测和肝组织检测具有良好一致性.未发生肝癌的慢性乙肝患者病毒载量高提示双突变发生率高,及早进行抗病毒等治疗有助于降低双突变发生率.
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乙型肝炎病毒基本核心启动子区1762/1764双突变与基因型和HBeAg血清学转换的关系
目的:观察慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)自然史中不同基因型乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子(basic core promoter,BCP)区1762(A-T)/1764 (G-A)双突变的分布,以及与中国常见HBV基因型的关系和对HBeAg血清学转换的影响.方法:随机选取168例未进行过抗病毒治疗的CHB患者,利用制备的特异性TaqManMGB探针,采用特异性探针实时荧光定量PCR(PSRT-PCR)方法对其血清行B、C基因型分型和双突变定量检测,比较双突变在B、C基因型的分布情况;同时采用微粒子化学发光免疫法(CMIA)检测血清HBeAg和抗HBe,比较B、C基因型各组双突变株和野生株病毒的HBeAg血清学转换.结果:C基因型CHB患者BCP区1762/1764双突变率(70.65％)明显高于B基因型(29.17％,P=0.000).观察HBeAg阴性CHB患者比例,B基因野生组明显高于其双突变组(28.57％,P=0.004)和C基因野生组(22.22％,P=0.000);C基因双突变组(63.08％)明显高于其野生组(22.22％,P=0.000)和B基因双突变组(28.57％,P=0.018).在所有HBeAg阴性患者中,B基因野生组抗HBe阳性率(84.00％)高于其双突变组(0.00％,P =0.003)和C基因野生组(16.67％,P=0.004);C基因双突变组抗HBe阳性率(19.51％)与其野生组(16.67％)和B基因双突变组(0.00％)比较,差异无统计学意义(P均=1.000).结论:在我国慢性HBV感染人群中,C基因型患者更易发生BCP区1762/1764双突变;B基因野生型患者易产生HBeAg阴性并伴有抗HBe阳性,HBeAg血清学转换较彻底;而C基因双突变患者易产生HBeAg阴性但不伴有抗HBe阳性,HBeAg血清学转换不彻底.
关键词： 乙型肝炎病毒 基本核心启动子 突变 基因型 乙型肝炎病毒e抗原血清学转换 -
乙型肝炎病毒基本核心启动子T1762A1764 联合突变的临床意义
目的:研究乙型肝炎患者乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子(BCP)T1762A1764联合突变情况及其临床意义.方法:采用聚合酶链反应(PCR)与限制性长度片段多态性分析(RFLP)相结合,检测130例乙型肝炎患者BCP区核苷酸(nt)1762碱基A→T和1764碱基G→A联合突变.结果:HBeAg(+)和HBeAb(+)两组患者中BCP T1762A1764联合突变率的不同频率分别为慢性乙型肝炎患者(Chronic hepatitis B, CHB)40.0%和85.7%, 无症状携带者(Asymptomatic carrier, ASC)22.2%和65.0%,献血员为5%.BCP T1762A1764双点联合突变组HBV-DNA≥105 cps/ml检出例数81例(96.4%),非突变组HBV-DNA≥105 cps/ml检出例数25例(54.3%).结论:BCP T1762A1764联合突变与乙型肝炎的发生、发展以及预后有关,可能是CHB与ASC患者HBeAg(-)的原因之一,可促进乙肝病毒繁殖.对慢性乙型肝炎患者检测HBV BCP T1762A1764联合突变有一定的临床意义.
关键词： 乙型肝炎病毒 基本核心启动子 变异 限制性片段长度多态性分析 -
慢性乙型肝炎乙肝病毒基本核心启动子变异的实验与临床研究
目的 研究乙型肝炎基本核心启动子(BCP)变异与慢性乙型肝炎病情的关系.方法 通过PCR及其产物直接检测128例慢性乙型肝炎(CHB)患者HBV,同时检测患者HBV定量及血清生化指标.结果 128例标本中nt1762、1764变异(双变异)共检出56例,nt1753、1762、1764变异(三变异)共检出10例,肝炎肝硬化(LC)组中双变异明显高于其他CHB组(P＜0.05);双变异组的HBeAg、ALB明显低于无变异组(P＜0.05),三变异组HBeAg明显低于双变异组(P＜0.05).结论 BCP区双变异可减少HBeAg的表达,引起肝功能受损严重并导致肝硬化的发生,BCP区尚有新发现的变异如三变异也可影响HBeAg的表达.
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HBV基本核心启动子区和前C区变异与HBeAg阴性患者肝癌发生的关系
目的 探讨HBV基本核心启动子区(BCP)和前C区(PreC)变异与HBeAg阴性患者肝癌发生的关系.方法 204例HBeAg阴性患者分为A组(肝硬化肝癌,102例)、B组(非肝硬化肝癌,36例)和C组(慢性乙型肝炎,66例).检测三组患者的HBV基因型及HBV BCP和PreC变异情况,分析HBV BCP和PreC变异与肝癌发生的关系.结果 A组中,HBV基因B型87例,C型14例,D型1例;B组中,HBV基因B型31例,C型5例;C组中,HBV基因B型54例,C型11例,D型1例.B组的A1896变异率高于C组(P<0.01).单因素和多因素分析发现,A1896变异是非肝硬化肝癌发生的危险因素(P<0.01).结论 在HBeAg阴性患者中,A1896变异是非肝硬化肝癌发生的危险因素,对于肝癌的筛查有重要价值.
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乙型肝炎病毒前核心区及基本核心启动子变异的检测及其对患者疾病谱的影响
目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前核心区(前C区,nt1896)及基本核心启动子(BCP,nt1762/1764)变异在慢性HBV感染者疾病谱的分布及对患者疾病谱的影响.方法416例血清HBsAg阳性、HBVDNA定量大于1.0×104拷贝/毫升的患者,采用微流基因芯片检测HBV前C区及BCP变异.结果416例HBV感染者中302例为HBeAg(-)患者,其中248例(82.12%)有前C区或BCP变异,41.06%为前C区变异,31.12%BCP变异,2种同时变异为9.94%.HBeAg(-)的慢性乙型肝炎和肝硬化患者前C区变异分别为64.72%和83.33%(x2=0.89,P＞0.05),均大于HBeAg(-)无症状携带者的28.47%(x2=54.20,P＜0.01;x2=5.29,P＜0.05);而HBeAg(-)无症状携带者BCP变异达77.19%,大于HBeAg(-)慢性乙型肝炎和肝硬化患者(x2=69.73,P＜0.01;x2=10.58,P＜0.01).而在114例HBeAg(+)患者中28.95%有前C区或BCP变异.结论前C区或BCP变异在慢性HBV感染者疾病谱的分布不同,在HBeAg(-)/HBV DNA(+)与HBeAg(+)/HBV DNA(+)患者变异率差异显著.HBV前C区可能是该病变反复及加重的一个重要原因,但BCP变异临床意义不明确.
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乙型肝炎病毒基因组基本核心启动子变异分析
目的 研究慢性乙型肝炎患者感染的HBV基因组中基本核心启动子基因变异状况.方法 收集16例慢性乙型肝炎患者的血清标本,抽提血清中HBV DNA,PCR法扩增HBV BCP区基因,PCR产物测序并分析核苷酸序列中的变异位点.结果 12例成功提取DNA,其中2例标本因PCR产物太弱,无法满足测序要求,其他10例测序标本均属于B型,与参考序列AF100309同源性高;发现HBV BCP共有5个变异点,分别为 T1753C、A1762T、G1764A、G1752A和A1775C.结论 HBV BCP变异可能影响HBV前C基因组mRNA转录,是HBV持续感染和肝病变进展的原因之一.
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海南汉族乙型肝炎病毒基因型与BCP区和前C区基因突变的关系
目的 探讨海南汉族乙型肝炎病毒(HBV)基因型与前C区G1896A和BCP区 A1762T/G1764A基因突变的关系.方法 采用RT-PCR方法检测乙型肝炎患者的HBV基因型,PCR方法扩增包含C启动子和前C区基因核苷酸(nt1643-nt2112),对PCR产物进行DNA测序.结果 基因型C的BCP区 A1762T/G1764A突变率(58.82%)显著地高于基因型B(10.53%)(P＜0.05).基因型C G1896A突变率为29.41%,基因型B G1896A突变率为47.37%,两者比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 不同基因型HBV致病能力可能与病毒基因组BCP区 A1762T/G1764A突变率的不同有关,而与前C区G1896A突变无关.
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焦磷酸测序技术检测HBV基本核心启动子变异的研究
目的 建立HBV基本核心启动子(BCP)区变异的快速检测方法.方法 采用焦磷酸测序(pyrosequencing)技术,设计一对引物,其中一条经生物素标记,PER扩增产物含HBV BCP A1762T/G1764A双突变的区域,借用生物素包被葡聚珠纯化单链PCR产物,设计一条测序引物,运用焦磷酸测序技术对A1762T/G1764A两个变异点进行变异分析.通过对已知变异类型的HBV分离株进行测定分析,评价所建立方法的检测敏感性和特异性.结果 PCR扩增后,可在2 h内得到A1762T/G1764A两个变异点的突变情况.所建立方法的检测灵敏度达到HBV-DNA血清中的含量为103copies/ml;在所分析的HBV BCP区均可检测出变异株、非变异株及混合株,且所检测的结果与直接测序方法结果符合率为95%.结论 Pyrosequencing技术用于检测病毒基因突变有高通量、自动化程度高和结果准确等特点,适用于对HBV BCP区突变进行快速高通量检测.
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乙型肝炎病毒前C区和BCP基因突变对肝脏疾病进程的影响
乙型肝炎病毒（ HBV）是人类肝脏疾病的主要病原体之一，感染呈世界性流行，目前全球大约有4亿HBV慢性感染者［1］，每年约有50万人死于HBV相关性肝硬化和肝细胞癌［2］；我国属于HBV高流行区。研究发现， HBV比其他DNA病毒更易出现变异，在HBV感染者体内常形成以一个优势株为主的相关突变株病毒群。 HBV基因突变给乙型肝炎的诊断、治疗及预后判断带来许多临床问题［3］。现将HBV前C区和BCP突变对肝脏疾病进程度的影响综述如下。
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HBV BCP区1762/1764位点变异对肝脏疾病进展及预后的影响
目的:探讨乙型肝炎病毒BCP区A1762T/G1764A变异与肝脏疾病进展的关系.方法:收集78例慢性乙型肝炎患者(CHB)和125例慢性重型乙型肝炎患者(CSHB)的血清及临床资料,并对所有入组患者进行随访,采用聚合酶链反应扩增HBV BCP区基因片段,产物纯化后直接测序,检测BCP区T1762/A1764位点变异.结果:CSHB组患者A1762T、G1764A及A1762T+ G1764A的变异频率分别为64.0％ (80/125)、60.0％ (75/125)、60.0％ (75/125),CHB患者3种变异的变异频率分别为30.8％(24/78)、28.2％ (22/78)、25.6％(20/78),CSHB组3种变异的变异频率均明显高于CHB组,差异有统计学意义(P ＜0.001).125例CSHB患者随访48周,死亡组A1762T/G1764A位点变异频率明显高于存活组,差异有统计学意义(x2=12.42,P＜0.001);A1762T/G1764A位点变异组的患者累积存活率明显低于未变异组(x2=9.742,P＜0.01).结论:HBV BCP区1762/1764位点变异可能会加重HBV感染后肝脏疾病病情,并且对慢性重型乙型肝炎的发病及预后可能起重要的作用.
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132例乙型肝炎病毒感染者基本核心启动子变异分析
目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)感染者基本核心启动子(BCP)变异情况.方法 收集HBV感染者血清标本132份(HBV DNA均阳性),用半巢式聚合酶链反应扩增HBV C基因部分片段,产物纯化后直接测序,检测BCP T1762/A1764变异.用S基因错配聚合酶链反应(PCR-RFLP)法确定HBV基因型.结果 51例乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性患者BCP T1762/A1764双变异检出率为27.45%,81例HBeAg阴性患者BCP T1762/A1764双变异检出率为62.96%,两组比较,差异有高度显著性(χ2=15.79,P=0.00).BCP T1762/A1764双变异的HBV感染者B基因型检出率为33.85%,明显低于C基因型的检出率66.15%(χ2=24.25,P=0.00).结论 HBV感染者普遍存在BCP T1762/A1764双变异,以c基因型感染者多见.
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熔点曲线法研究HBV基因B型BCP区变异与临床表现的关系
目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)基因B型基本核心启动子(BCP)的变异及其临床意义.方法 收集HBV携带者、慢性乙型肝炎、慢性重型肝炎等3种临床类型的患者血清226份,采用巢式多聚酶链式反应(PCR)扩增HBV DNA,选取上述3种类型各50例B基因型患者,采用熔点曲线方法进行BCP区的变异检测.结果 226例患者中B基因型210例(92.9％),C基因型16例(7.1％)；150例不同病情的B基因型患者中,慢性重型肝炎患者的熔点曲线平均波峰数量多于慢性HBV携带者及慢性乙型肝炎患者,差异有统计学意义(P＜0.05),而HBV携带者与慢性乙型肝炎比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 B基因型患者BCP区变异与临床表现存在一定的关系,病情重者准种数量较多.
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乙型肝炎病毒基本核心启动子区热点突变与广西肝癌家族聚集性的相关性
目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）基本核心启动子（BCP）区突变与广西肝癌家族聚集的相关性。方法：从广西肝癌高发及无癌家族中配对选取 HBsAg 阳性成员各103例。采用聚合酶链反应（PCR）扩增BCP 区并测序分析。结果：BCP 区突变发生在前5位的热点位点为 T1762、A1764、G1775、V1753、G1803。单因素分析：HBV DNA≥105 copies／mL、T1762、A1764和V1753突变均与肝癌高发有关（P＜0．05）。多因素Logistic分析显示：HBV DNA≥105 copies／mL和 A1764突变是肝癌高发的独立危险因素。结论：HBV DNA水平、BCP区突变与广西肝癌家族聚集存在相关性。
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HBeAg阴性血清中乙肝病毒基本核心启动子变异研究
目的:了解本地区乙型肝炎病毒(HBV)流行株基本核心启动子(BCP)的变异特点,为临床提供诊疗信息.方法:通过设计3条特异性引物进行半巢式PCR扩增患者血清中HBV BCP序列,克隆入pUCm-T载体中进行DNA测序和比对分析.结果:BCP变异主要集中在TATA样盒中的TA1、TA2、TA3区,而TA4极为保守,TA1-TA4未见插入或缺失突变.结论:BCP变异具有一定的地域特点,BCP变异可使HBeAg阴转.
