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2013-2014年杭州地区季节性A (H3N2)流感病毒PB1基因及其编码蛋白的遗传进化特征研究
目的 分析2013-2014年杭州市季节性A(H3N2)流感病毒PB1基因及其编码蛋白的变异情况,揭示其分子特征与遗传进化趋势.方法 对分离得到的78株流感病毒PB1基因进行扩增和测序,采用序列多重比对、突变位点比较分析和构建进化树等方法进行遗传进化分析.结果 78株流感病毒PB1基因的核苷酸序列和编码蛋白序列一致性分别为97.89％～100.00％和99.08％～ 100.00％,PB]-F2蛋白短肽的序列一致性为44.44％～ 100.00％;PB1蛋白氨基酸序列与参考株A/Texas/50/2012相比,在十多个位点均发生了氨基酸突变,其中V212M、R215K、E331D、A374S氨基酸突变频率较高;PB1-F2蛋白长度分析发现了5种不同的PB1 F2蛋白,其中3种为全长蛋白(90、87、79) aa,2种为截断型PB1-F2蛋白(52,24) aa;构建系统进化树发现78株H3N2毒株PB1基因及其编码蛋白均在同一个支系上,与同期流行季的疫苗株进化关系较近,第三个流行高峰(2014年6～10月)进化关系相对更集中.结论 2013-2014年季节性A (H3N2)流感病毒PB1蛋白氨基酸位点发生了部分重要突变,病毒PB1基因及其编码蛋白的遗传进化以及截断型PB1-F2蛋白的集中出现,可能促使病毒的复制能力和毒力发生变化,并终导致其流行传播趋势的改变.
关键词： A (H3N2)流感病毒 PB1 PB1-F2 遗传进化 -
pSIREN/PB1 siRNA重组质粒抗甲型流感病毒研究
目的 研究重组质粒pSIREN/PB1在鸡胚尿囊液中干扰甲型流感病毒复制的效果.方法 设计1对编码PB1siRNA的寡核苷酸序列,经退火互补形成双链,再克隆至带有U6启动子的RNAi ready pSIREN-shuttle线性化载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,双酶切和测序鉴定重组质粒pSIREN/PB1.大量提取重组质粒pSIREN.PB1,用脂质体进行包裹后,按每只鸡胚90 μg质粒量接种于10日龄鸡胚尿囊腔,4血凝单位甲型流感病毒液分别于质粒接种后0 h、24 h、48 h接种于鸡胚尿囊腔,流感病毒接种48 h后收集无色澄清尿囊液进行血凝实验检测流感病毒效价.结果 甲型流感病毒PB1基因的siRNA编码序列成功克隆至pSIREN质粒载体.经酶切和测序分析,重组质粒pSIREN/PB1中的siRNA编码序列均完全正确.将脂质体包裹的pSIREN.PB1质粒和病毒液同时注射入鸡胚尿囊腔后,收获的甲型流感病毒效价低.结论 成功构建了表达甲型流感病毒PB1siRNA的重组质粒pSIREN.PB1,并且它可以抑制鸡胚中流感病毒复制.此研究进一步证实了RNA干扰对流感病毒复制的抑制作用,为开发流感基因防治新方法奠定了基础.
