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Chelex-100提取生物检材DNA实时PCR定量研究
目的 研究Chelex-100法提取的生物检材DNA用量与复合STR分型成功率的关系.方法 113份各种生物检材采用Chelex-100法提取DNA,应用Quantifiler人类DNA定量试剂盒在ABI 7500荧光定量PCR仪上进行实时PCR定量,同时用Identifiler复合扩增系统在ABI 3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型. 结果 各种生物检材提取的DNA浓度分别为: 37份滤纸、纱布血痕0.042～5.28ng/μl,16份口腔拭子1.15～4.21ng/μl,18份烟头0.016～1.46ng/μl,10份肋软骨0.531～14.40ng/μl,8份肌肉5.75～24.80ng/μl,7份指甲0.788～11.50ng/μl,17份精斑0.79～99.50ng/μl.在建立的8μl扩增体系中,根据上述结果,调整用于复合STR扩增的DNA模板量在0.5～3ng之间,大部分样品可获得完全的STR分型.结论 Chelex-100法提取的检材DNA模板用量在0.5～3ng之间可得到有效STR扩增,浓度为0.5ng/μl以上的DNA样品,用小体积模板(1μl)比大体积(3μl)模板扩增效果好.
关键词： 法医物证学 实时定量PCR Chelex-100法 DNA定量 复合STR扩增 -
国产磁珠结合自动化工作站批量提取生物检材DNA的应用
目的 建立国产磁珠结合自动化工作站批量提取案件中牛物检材DNA的方法.方法 采用国产磁珠结合Bio-Robert Universal System自动化工作站对案件中常见的生物样本进行DNA提取,检测Identifiler系统16个STR基因座,在ABI3130XL遗传分析仪上进行STR分型.其中210份样品同时在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量.结果 9 100份10类生物检材应用国产磁珠结合自动化工作站,大部分可提取到足够的DNA进行STR检验.STR检验成功率高的为口腔拭子、肌肉,达100%,接触细胞检材的成功率较低,为50.0%.结论 国产磁珠结合自动化工作站可用于案件中常见的大部分生物样本的DNA提取.
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微量口腔脱落细胞检材的DNA检验
目的 寻求提高微量口腔脱落细胞检材的DNA检验成功率的简便有效的提取方法.方法 对不同载体上的100份微量口腔脱落细胞检材采用小体积Chelex-100法提取DNA,在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量,同时用IdentifilerTM复合扩增系统扩增.在ABl3130遗传分析仪上进行STR分型.结果 从25根饮料吸管上提取的DNA量在0.72～116.7.8 ng,16个水杯杯缘提取的DNA量在2.15-142.5 ng, 31个饮料瓶(罐)口提取的DNA量在1～34.65ng,10根筷子上提取的DNA量在3.35～26.6ng,12个果核中提取的DNA量在0.294～21.4ng,6份吃剩的骨头中提取的DNA量在0.88～5.88ng.100份检材性别及9个以上STR位点分型成功率平均为59.38%.除了使用者的个人原因外,检材的提取送检方式、检材的质地、饮料的性质对提取的DNA量有显著影响,是否加蛋白酶K对提取的DNA量无显著影响. 结论 采用小体积Chelex-100法可对60%左右的微量口腔脱落细胞检材提取DNA进行STR分型.
