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CPI-17、ILK、ZIPK与PKCα、ε在低氧大鼠血管平滑肌中的相互作用
目的 本实验室前期研究发现蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PKCα)、蛋白激酶Cε(protein kinase Cε,PKCe)可能通过改变CPI-17(PKC-potentiated inhibitory protein for protein phosphatase 1 of 17kDa)、ILK(integrin-linked kinase)、ZIPK(zipper-interacting protein kinase)的蛋白表达和活性,来调节失血性休克后血管钙敏感性,但这些分子是否存在直接相互作用,尚不清楚.本实验观察CPI-17、ILK、ZIPK与PKCoα、ε在低氧血管平滑肌细胞(vascualr smooth muscle cell,VSMC)中的相互作用.方法 采用低氧培养的大鼠VSMC,运用免疫共沉淀技术,观察PKCα、ε与下游分子CPI-17、ILK、ZIPK,以及CPI-17、ILK、ZIPK之间的相互作用.结果 (1)在PKCα抗体捕获的免疫沉淀中,ILK、ZIPK抗体,尤其是ILK抗体可杂交出明显蛋白条带,CPI-17抗体不能杂交出蛋白条带;(2)在PKCε抗体捕获的免疫沉淀中,ILK、ZIPK抗体均可杂交出明显蛋白条带,CPI-17抗体不能杂交出蛋白条带;(3)在CPI-17抗体捕获的免疫沉淀中,ILK、ZIPK抗体可杂交出明显蛋白条带;在ILK抗体捕获的免疫沉淀中,ZIPK抗体可杂交出明显蛋白条带.结论 PKCα可直接作用于ILK,PKCε可直接作用于ILK和ZIPK,ILK、ZIPK可直接作用于CPI-17,ILK可直接作用于ZIPK.上述分子相互作用,形成网络,共同调节大鼠失血性休克后的血管钙敏感性.
