X染色体骨髓酪氨酸激酶在内毒素/脂多糖诱导RAW264.7小鼠单核巨噬细胞促炎性细胞因子产生中的作用及机制

目的 探讨X染色体骨髓酪氨酸激酶(BMX)在LPS诱导小鼠单核巨噬细胞产生TNF-α和IL-1β中的作用及相关机制. 方法 将RAW264.7小鼠单核巨噬细胞接种于6孔板中,常规培养,用于以下实验.(1)取细胞,按随机数字表法分为空白对照组、LPS对照组及75、750、7 500、75 000 nmol/L BMX-IN-1预处理组,每组8孔.空白对照组细胞常规培养25 h;LPS对照组细胞常规培养24 h后,用终质量浓度(下同)为0.1μg/mL LPS刺激1h;后4组细胞分别用终物质的量浓度(下同)为75、750、7 500、75 000 nmol/L的BMX-IN-1处理24 h后,用0.1 μg/mL LPS刺激1h.实时荧光定量RT-PCR法检测各组细胞中TNF-α mRNA表达量,筛选BMX-IN-1佳作用浓度.(2)取细胞,按随机数字表法分为LPS对照组及BMX-IN-1预处理2、4、8、12、18h组,每组8孔.LPS对照组细胞用0.1 μg/mL LPS刺激1h;后5组细胞用佳作用浓度的BMX-IN-1分别处理2、4、8、12、18h后,用0.1 μg/mL LPS刺激1h.实时荧光定量RT-PCR法检测各组细胞中TNF-α mRNA表达量,筛选BMX-IN-I佳作用时间.(3)取细胞,按随机数字表法分为空白对照组、BMX-IN-1对照组、LPS对照组和BMX-IN-I+ LPS组,每组16孔.空白对照组细胞常规培养佳作用时间加1 h;BMX-IN-1对照组细胞用佳作用浓度BMX-IN-1处理佳作用时间后,常规培养1h;LPS对照组细胞常规培养佳作用时间后,用0.1 μg/mL LPS刺激1 h;BMX-IN-1 +LPS组细胞用佳作用浓度BMX-IN-1处理佳作用时间后,用0.1 μg/mL LPS刺激1h.采用实时荧光定量RT-PCR法检测各组细胞中TNF-α和IL-1 β mRNA表达量,蛋白质印迹法检测各组细胞中BMX和p38MAPK活性,样本数均为8.对数据行单因素方差分析和LSD检验. 结果 (1)与空白对照组比较,其余5组细胞中TNF-α mRNA表达量显著增高(P值均小于0.01).与LPS对照组比较,各BMX-IN-1预处理组细胞中TNF-α mRNA表达量均下降,但仅75 000 nmol/L BMX-IN-1预处理组细胞中TNF-α mRNA表达量显著降低(P＜0.05).BMX-IN-1佳作用浓度为75 000 nmol/L.(2)与LPS对照组比较,BMX-IN-1预处理2、4h组细胞中TNF-α mRNA表达量无明显变化(P值均大于0.05),BMX-IN-1预处理8、12、18 h组细胞中TNF-α mRNA表达量显著降低(P＜0.05或P＜0.01).其中,BMX-IN-1预处理12 h组细胞中TNF-α mRNA表达量低.BMX-IN-1佳作用时间为12h.(3)BMX-IN-1对照组细胞中TNF-α和IL-1β mRNA表达量分别为0.97 ±0.13、0.98 ±0.06,与空白对照组的1.00相近(P值均大于0.05).LPS对照组细胞中TNF-α和IL-1 β mRNA表达量分别为2.97 ±0.17和3.07 ±0.60,BMX-IN-1+ LPS组细胞中TNF-α和IL-1β mRNA表达量分别为2.31 ±0.94和2.55 ±0.73,均显著高于空白对照组(P值均小于0.01).BMX-IN-1+ LPS组细胞中TNF-α和IL-1 β mRNA表达量明显低于LPS对照组(P值均小于0.05).BMX-IN-1对照组细胞中BMX和p38MAPK活性分别为0.95 ±0.19和0.98±0.18,均与空白对照组的1.00 ±0.14和1.00±0.22相近(P值均大于0.05);LPS对照组细胞中BMX和p38MAPK活性分别为1.98 ±0.33和2.05±0.34,均显著高于空白对照组(P值均小于0.01).BMX-IN-1+ LPS组细胞中BMX和p38MAPK活性分别为1.00 ±0.17和1.67 ±0.27,明显低于LPS对照组(P＜0.05或P＜0.01). 结论 BMX可促进LPS诱导小鼠单核巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1 β的产生,该作用可能与BMX活化p38MAPK途径有关.