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生长分化因子 5文献资料
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生长分化因子5基因真核表达质粒pcDNA3．1（＋）／hGDF5的构建、鉴定及其活性检测
目的：构建生长分化因子5（growth／differentiation factor 5，GDF5）基因的真核表达质粒 pcDNA3．1（＋）／hGDF5，并对其进行鉴定和活性检测。方法根据 Genbank中人 GDF5序列设计并合成引物，以 pCA350-hGDF5质粒为模板进行聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）扩增获得 GDF5基因，并与 pcDNA3．1（＋）质粒连接构建真核表达质粒 pcDNA3．1（＋）／hGDF5。pcDNA3．1（＋）／hGDF5经限制性内切酶消化、PCR扩增进行鉴定。将 pcDNA3．1（＋）／hGDF5分别转染 MC615细胞及293细胞，利用 PCR、Western blotting及免疫荧光法检测 GDF5 mRNA及蛋白的表达。结果真核表达质粒 pcDNA3．1（＋）／hGDF5经限制性内切酶酶切、PCR扩增表明构建成功，PCR、Western blotting及免疫荧光实验结果显示真核表达质粒 pcDNA3．1（＋）／hGDF5能在MC615细胞及293细胞中稳定表达。结论成功构建了真核表达质粒 pcDNA3．1（＋）／hGDF5，为进一步研究GDF5的功能奠定了基础。
