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鼠疫耶尔森氏菌caf1和pH6基因的原核表达
目的 利用DNA重组技术,在大肠杆菌中获得融合表达的鼠疫耶尔森氏菌caf1及pH6抗原基因. 方法 利用分子克隆技术克隆后,在原核系统中表达鼠疫菌重要功能蛋白car1及pH6蛋白,根据云南玉龙菌株(D106004)全基因组序列设计引物,PCR扩增目的基因片段;采用pET-32a(+)作为表达载体,通过双酶切和连接反应,将目的基因片段定向插入载体中,构建重组表达质粒;IPTG诱导,使重组质粒在其宿主菌E.coli BL21 (DE3)中表达. 结果 根据酶切鉴定和PCR产物测序结果显示,目的基因caf1及pH6已成功连接到表达载体pET-32a(+)上,SDS-PAGE结果显示表达产物的相对分子质量约为34.2 ku和35.5 ku,与理论分子量一致. 结论成功克隆并构建了pET32a-car1及pET32a-pH6重组基因原核表达系统,为鼠疫潜在诊断靶点及新型疫苗选择的可能性奠定了基础.
