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补体膜辅助调节蛋白文献资料
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构建人补体膜辅助调节蛋白真核表达载体并通过壳聚糖介导转染NIH 3T3细胞
目的:构建人补体膜辅助调节蛋白(membrane cofactor protein,MCP)真核表达载体并利用壳聚糖(Chitosan)转染小鼠NIH 3T3细胞.方法:应用PCR方法,从MCP-pGEM-T Easy Vector克隆相关的DNA序列,插入到具有相应酶切位点的真核表达载体pSecTag2/HygroB中,构建pSecTag2/HygroB-MCP真核表达质粒,并进行酶切鉴定及序列测定;利用壳聚糖包裹质粒,转染小鼠NIH 3T3细胞,并对转染细胞进行抗MCP免疫组织化学染色.结果:MCP基因大小为1 065 bp,与Genebank中记载的人MCP cDNA序列结果基本一致;抗MCP免疫组织化学染色显示转染细胞胞浆弥漫阳性.结论:成功构建了人MCP真核表达载体并通过壳聚糖介导转染NIH3T3细胞,为进一步探讨及研究转基因肝脏奠定了基础.