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@真核载体的构建文献资料
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SARS病毒M蛋白编码基因真核载体的构建及酵母表达菌株的建立
目的:构建SARS冠状病毒M蛋白N端编码基因1～129bp的真核表达载体,并分析其在毕赤酵母GS115中的表达情况.方法:用PCR方法从质粒pGEX-6P-1+SARS-M上扩增出M编码基因片段,克隆至真核表达载体pPIC9上,构建重组质粒pPIC9+SARS-M.重组质粒经酶切鉴定和核苷酸测序鉴定后,转化毕赤酵母GS115,用甲醇诱导重组M蛋白片段表达.结果:酶切鉴定及核苷酸序列测定表明重组质粒的构建完全正确.对甲醇诱导后重组毕赤酵母培养上清行SDS-PAGE电泳分析,在相对分子量约为10 000处有重组蛋白的表达.结论:SARS冠状病毒M蛋白N端1～43aa在毕赤酵母中获得了高效、分泌性表达.
