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人角蛋白细胞文献资料
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应用MTT法观察人皮肤培养细胞的形态学特征
目的:在创面愈合细胞生物学研究时,应用MTT比色法测定细胞活性和生长增殖;探讨及时观察细胞生长状态下的形态变化的可行性.方法:人角朊细胞(HK)和人真皮成纤维细胞(HDF)不同生长密度时加入MTT溶液后,观察不同时间点细胞的形态,测定细胞内形成镜下可见蓝色甲臜及胞外形成针状结晶的时间;比较镜下观察时间长短对MTT比色法终测定值的影响.结果:在不同生长密度条件下,加入MTT溶液后,HK和HDF置于37℃孵育,分别于10 min及5min即可形成细胞内镜下可见的蓝色甲臜结晶物,并随孵育时间延长而增加.该活细胞染色法,可将处在培养生长状态的活细胞清晰地显现出来;在90 min～60 min及120 min～90 min时,两种细胞分别形成胞外针状结晶,干扰细胞形态的进一步观察;不论细胞密度高低,标准实验室环境内进行短时间(≤15 min)观察细胞形态及拍照记录均不对MTT比色法测定细胞HK及HDF的活性及生长增殖结果产生影响.结论:采用MTT法测定培养的人皮肤附壁生长细胞活性及生长增殖量,可于适当时间内清楚地观察细胞生长状态;普通倒置显微镜下进行短时间的观察不会影响MTT法的终测定值.该方法简单、实用.
