首页 > 文献资料
-
抗生素效价测定中试用菌应注意的问题
抗生素微生物检定法是利用抗生素对细菌(或真菌)的杀死或抑制程度,作为客观指标来衡量抗生素中有效成分的效力的一种方法,抗生素微生物检定法中以管碟法为国际通用方法,中国药典微生物检定法也一直采用管碟法[1]观察抑菌圈的面积或直径,从动力学方程可以看出,抑菌圈的大小受扩散系数、扩散时间、抗生素的总量、培养基的厚度及低抑菌浓度因素的影响[2].其实,试验菌对抑菌圈的大小及清晰度也有很大影响.笔者主要从以下几个方面介绍使用试验菌时应注意的问题.
-
锥虫蓝直接染色法鉴定人羊膜细胞活力方案研究
目的 摸索锥虫蓝直接染色法在人羊膜细胞活力快速鉴定中的适宜浓度及染色时间.方法 取健康剖宫产产妇的胎膜6张,浸泡后分离羊膜并剪成1 cm×1 cm备用.(1)取部分制备好的羊膜分别浸泡于1、2、3、4 g/L4种浓度的锥虫蓝溶液中,每个浓度下各浸泡1、3、4、10 min后取出,在PBS中漂洗30s,更换PBS,继续漂洗30 s.存光学显微镜下选取4个视野拍照,每个视野计数1000个细胞,同时计数蓝染细胞计算细胞死亡率.(2)另取部分制备好的羊膜浸泡于0.5 g/L氯己定1h后行锥虫蓝直接染色,锥虫蓝溶液浓度与染色时间为前一实验结果选定的浓度、时间,并与1 g/L锥虫蓝染色10 min对比.后续操作及检测同前一试验.对数据行两因素析因设计方差分析、Duncan多范围检验及LSD检验. 结果 (1)1、2、3 g/L锥虫蓝染色1、3 min后细胞死亡率相近(P值均大于0.05),染色4、10 min后细胞死亡率明显高于1、3 min(P值均小于0.05).4 g/L锥虫蓝染色1、3、4 min后细胞死亡率相近(P值均大于0.05),染色10 min后细胞死亡率显著高于1、3min(P值均小于0.05).锥虫蓝浓度为2、3、4 g/L时,各时相点细胞死亡率都显著高于1 g/L(P值均小于0.05).(2)对经0.5 g/L氯己定浸泡1h羊膜染色显示,1 g/L锥虫蓝染色1 min细胞死亡率[(72.6±7.4)％]显著低于预计死亡率(100.0％,P ＜0.05),染色3 min细胞死亡率[(95.3±5.6)％]、染色10 min细胞死亡率[(99.8±5.0)％]与预计死亡率相近(P值均大于0.05). 结论 锥虫蓝直接染色法鉴定人羊膜细胞活力的适宜方案为浓度1 g/L,染色时间3 min.
