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变形链球菌 UA159合成自诱导分子2及其影响因素的实验研究
目的:原核表达纯化变形链球菌(S.mutans)UA159 LuxS 蛋白,体外合成有活性的自诱导分子2(AI-2)并观察其合成的影响因素。方法:用基因重组的方法构建表达载体 pET21 a(+)-luxS,在大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中诱导表达 S-核糖基高半胱氨酸酶(LuxS)融合蛋白,镍柱亲和层析纯化、蛋白质印迹法分析鉴定 LuxS 蛋白,透析复性。纯化的 LuxS 蛋白和 S-腺苷高半胱氨酸核苷酶(Pfs)蛋白催化 S-腺苷 L 高半胱氨酸[SAH]合成 AI-2,哈氏弧菌 BB170检测 AI-2活性,并观察 LuxS 蛋白浓度、pH、氟化钠对 AI-2合成的影响。结果:与对照组相比,随着 LuxS 蛋白浓度的升高,体外合成的 AI-2活性增大(P <0.001);当 pH 介于6~10之间时,AI-2活性强,超出此 pH 范围,AI-2活性明显降低(P <0.001);当氟化钠浓度≥0.3%时,AI-2活性显著降低(P <0.05)。结论:利用基因工程技术可以合成具有生物活性的 S.mutans UA159 AI-2;AI-2合成的适 pH 在6~10之间;氟化钠浓度≥0.3%对 AI-2的合成有抑制作用。