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HSV-单纯疱疹病毒属文献资料
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自杀基因系统HSV1-TK/GCV对MEC-1细胞的体外杀伤及诱导凋亡作用
目的:探讨HSV-TK/GCV系统对MEC-1细胞的体外作用.方法: 用脂质体介导将含有HSV1-TK 全长cDNA的真核表达质粒G1NATK转染人黏液表皮样癌细胞系MEC-1,经G418筛选,挑选阳性克隆,用PCR及RT-PCR检测目的基因的整合及mRNA转录;分别用MTT及细胞记数法检测TK阳性细胞对GCV的体外敏感性及旁观者效应;用倒置显微镜、HE染色、活细胞荧光染色及TUNNEL染色观察GCV作用下MEC-1/TK的形态学变化.结果: PCR及RT-PCR分别从G418阳性克隆中成功扩增出404 bp 的特异性基因片段,将此G418抗性克隆命名为MEC-1/TK;IC50MEC-1/TK为0.7 μg/ml, 而MEC-1为1 000 μg/ml以上;当将TK阳性细胞和TK阴性细胞以不同比例混合,TK阳性细胞只占10%时,即有90%的细胞被杀死;形态学观察表明,经GCV作用,MEC-1/TK细胞变圆、脱壁、漂浮,部分细胞呈现核浓缩、核碎裂等特征,TUNNEL染色核阳性着色细胞明显增多.结论: HSV-TK/GCV系统在体外能明显杀伤MEC-1细胞,对GCV的敏感性比未转染的亲本细胞提高1 000倍以上,并显示较强的旁观者效应;GCV可诱导部分MEC-1/TK细胞发生凋亡.
关键词： HSV-单纯疱疹病毒属 胸苷激酶 更昔洛韦 基因疗法 人黏液表皮样癌细胞系 旁观者效应
