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中波紫外线对皮肤成纤维细胞纤维连接蛋白及EDA、EDB表达的影响
目的 探讨中波紫外线UVB照射对皮肤成纤维细胞纤维连接蛋白(fibronectin, FN)及其选择性剪接片段EDA、EDB的影响.方法 用RT-qPCR法检测UVB照射后成纤维细胞各时相FN及其EDA、EDB片段的mRNA表达水平.结果 UVB100mJ/cm2照射后成纤维细胞FN及FN-EDA、EDB的 mRNA表达均有下降.照射后l、2、4、8、12、24h组与对照组(Oh)比较,差异有统计学意义(P均＜0.05).结论 中波紫外线UVB下调皮肤成纤维细胞FN及FN-EDA、EDB mRNA表达,在 UVB引起的皮肤成纤维细胞急性光损伤过程中,FN及FN-EDA、EDB可能发挥着重要作用.
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皮肤成纤维细胞纤维连接蛋白及其EDA、EDB表达与损伤时间的关系
目的 研究培养的皮肤成纤维细胞纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及其可变剪接片段EDA、EDB在损伤后的mRNA水平,为推断早期损伤时间提供参考指标.方法 培养人体皮肤成纤维细胞,换无血清培养液培养24 h后,采用划痕法制作细胞损伤模型,损伤后0、0.5、1、2、6、24 h收集细胞,抽提RNA,实时RT-PCR定量检测总FN及其EDA、EDB的mRNA水平的变化.结果 皮肤成纤维细胞中总FN及其EDA、EDB的mRNA水平随损伤时间的延长而升高.EDAmRNA在损伤后1h达到高峰,EDBmRNA在损伤后6h达到高峰,FNmRNA在损伤后2h达到高峰;在损伤1h后总FN及其EDA、EDB的mRNA表达变化随时间的延长而呈现一种不断上升的趋势.结论 纤维连接蛋白EDA、EDB可作为早期损伤时间推断的较理想的参考指标.
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重组纤维连接蛋白EDA-EDB融合蛋白的分子克隆
目的构建重组pET28a-EDA-EDB质粒,制备重组纤维连接蛋白EDA-EDB融合蛋白.方法采用基因重组技术,将EDA、EDB基因片段连接,再将该重组基因插入pET28a表达载体,表达重组融合EDA-EDB蛋白后,利用6×His/Ni-NTA纯化系统进行纯化,免疫印迹法检测.结果成功连接EDA、EDB基因片段,重组pET28a-EDA-EDB质粒;在大肠杆菌BL21(DE3)中高度表达重组蛋白,获得较纯的重组蛋白,免疫印迹法证实为FN的组分.结论EDA-EDB重组蛋白能采用pET系统在大肠杆菌中表达,并可通过6×His/Ni-NTA纯化系统进行纯化而获得免疫原.
