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重组牛白细胞介素4文献资料
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重组牛白细胞介素4的原核表达及其单克隆抗体研制
目的:原核表达重组牛白细胞介素4(rBoIL-4)并制备针对抗rBolL-4的单克隆抗体(mAb).方法:通过PCR从重组质粒pSP73-BOIL-4中扩增BoIFN-γ基因,分别克隆入表达载体pGEX-6p-1和pET-30a(+)中,构建重组菌并对其进行诱导表达、纯化和鉴定.以纯化的融合蛋白rHis-BoIL-4为免疫原,用纯化的rGST-BoIL-4为筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术,研制抗rBoIL-4的mAb.结果:获得表达BOIL-4基因的重组菌BL21(pGEX-6p-1-BOIL-4)和BL21(DE3)(pET-BOIL-4),重组蛋白相对分子质量(Mr)的大小分别为39 000和19 000,且以包涵体的形式存在.获得7株可稳定分泌抗rBoIL-4 mAb的细胞株,命名为2B8、4A10、5D6、5D8、7G10、8B7和10F8,这些mAb腹水的效价依次为5 000、160 000、10 000、640 000、5 000、40 000和40 000,mAb亚类均为IgG1.Dot-ELISA的结果表明,7株mAb只与融合蛋白rHis-BoIL-4和rGST-BolL-4起反应,而不与其他重组细胞因子和对照细菌起反应,显示出良好的特异性.Western blot试验显示,7株mAb均能与相应的融合蛋白发生反应,出现特异性条带.同时7株mAb均能与BoIL-4的标准品起反应.结论:7株抗rBoIL-4的mAb均具有高度的特异性,为进一步研究其在牛的免疫调控、牛疫病的致病机制及其诊断中的应用奠定了基础.
