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磷酸化标签文献资料
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磷酸化标签方法检测异染色质蛋白1αDNA损伤后蛋白磷酸化状态
目的 通过检测异染色质蛋白1α (HP1α)在DNA损伤后的磷酸化状况,介绍一种用磷酸化标签(phos-tag)试剂检测磷酸化蛋白质的新方法.方法 取雄雌C57小鼠交配后孕13.5 d胚胎,分离并原代培养小鼠胚胎成纤维细胞.对照组及实验组(6个损伤时间点)各取2个100mm培养皿的细胞进行实验,实验组细胞用喜树碱进行DNA损伤；对照组用等量的二甲基亚砜处理.用掺入phos-tag的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白并转印,将膜用抗HP1α的抗体孵育,用偶联辣根过氧化物酶的抗体做二抗,通过成像系统检测蛋白.结果 实验组存在一条与HP1α有明显不同迁移率的磷酸化HP1α条带,与对照组相比DNA损伤后磷酸化HP1α含量一过性增多.结论 HP1α被DNA损伤诱导为磷酸化状态,提示其可能在DNA修复过程中扮演重要角色.Phos-tag蛋白质印迹法可采用普通抗体检测磷酸化的蛋白,是一种简便易行的检测未知磷酸化蛋白质的新方法.
