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普鲁卡因与5'-氮杂-2'-脱氧胞苷对人肝肿瘤细胞株HepG2中Wif-1基因启动子甲基化影响的比较研究
目的 探讨普鲁卡因与5’-氮杂-2’脱氧胞苷(5'-Aza-2'-deoxycycytidine,5-aza-dc)对人肝肿瘤细胞株HepG2经典Wnt信号通路抑制因子-1(Wif-1)基因启动子脱甲基化作用的影响.方法 以普鲁卡因或5-aza-dc干预HepG2细胞,采用RT-PCR及Western blot检测干预前后Wif-1基因mRNA及蛋白的表达；甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific polymerase chain reaction,MSP)检测干预前后HepG2细胞中Wif-1甲基化变化.结果 RT-PCR和Western blot结果显示经普鲁卡因或5-aza-dc作用前HepG2细胞Wif-1基因mRNA与蛋白呈低表达或缺失,经普鲁卡因或5-aza-dc作用后HepG2细胞Wif-1基因mRNA与蛋白呈高表达,各组间比较差异有统计学意义,且普鲁卡因实验组表达高于5-aza-dc实验组(P＜0.05).MSP结果显示,经普鲁卡因或5-aza-dc干预后HepG2细胞与干预前HepG2细胞比较均呈部分脱甲基化状态,对应的甲基化率分别为(14.41±3.37)％和(29.29±1.84)％(P＜0.05).结论 普鲁卡因及5-aza-dc均可影响Wif-1基因启动子CpG岛的甲基化状态.普鲁卡因可以作为一种新的去甲基化药物且效果优于常规药物5-aza-dc.
关键词： 经典Wnt通路 WIF-1 5’-氮杂-2’-脱氧胞苷 普鲁卡因 甲基化 -
5’-氮杂-2’-脱氧胞苷对HT-29和LoVo结直肠癌细胞株中Runx3基因甲基化状态,mRNA表达及蛋白表达的影响
目的：探讨甲基化酶抑制剂5’‐氮杂‐2’‐脱氧胞苷（5’‐Aza‐2’‐deoxycytidine ，5’‐Aza‐CdR）对结直肠癌细胞株HT‐29和LoVo中Runx3基因甲基化水平、mRNA及蛋白表达的影响。方法用不同浓度5’‐Aza‐CdR处理结直肠癌细胞株HT‐29和LoVo。应用 TaqMan探针为基础的实时定量PCR（Methylight）方法、SYBR Green PCR方法及蛋白印迹实验（Western blot）检测药物处理前后 HT‐29和LoVo细胞中Runx3基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达。结果 TaqMan探针为基础的实时定量PCR法检测HT‐29和LoVo细胞中Runx3蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转；实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0．5，1．0，1．5μM 5’‐Aza‐CdR处理后Runx3基因mRNA和蛋白均重新表达，具有统计学意义（P均＜0．05）。结论结直肠癌细胞株 HT‐29和LoVo中Runx3启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5’‐Aza‐CdR能够较成功的逆转结直肠癌细胞株HT‐29和LoVo中Runx3基因的甲基化状态，并能恢复mRNA及蛋白重新表达。
