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α1(I)基因调控文献资料
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转录因子LAP反式激活α1(I)胶原基因在肝脏星状细胞中的表达
目的了解激活的肝脏星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)中一种肝脏组织特异的转录因子肝脏激活蛋白(liver activator protein, LAP)在α1(I)基因表达调控中的作用.方法采用链霉蛋白酶、胶原酶原位灌注、Nycodenz密度梯度离心分离大鼠HSC,并进行体外培养使之活化.构建含人α1(I)胶原基因启动子片段(-804～+1 452或-804～+222碱基)的荧光素酶报告基因质粒.用构建的报告基因质粒与LAP表达质粒一起,用阳离子脂质体介导的方法,瞬时共转染激活的HSC细胞.α1(I)基因启动子的活性通过测定荧光素酶活性来确定.结果构建的含α1(I)基因第一内含子片段的荧光素酶报告基因(PGL3-col)比不含α1(I)基因第一内含子的报告基因[PGL3-col(△intron)]在HSC中有较强的表达(荧光素酶活性为315±45 U/mg蛋白与220±70 U/mg蛋白,P＜0.05).瞬时共转染LAP表达质粒可明显增强PGL3-col及PGL3-col(△intron)报告基因在HSC中的表达(荧光素酶活性分别为587±62 U/mg蛋白与315±45 U/mg蛋白及326±52 U/mg蛋白与220±70 U/mg蛋白,两者比较,P＜0.05).结论 LAP可以反式激活(诱导)α1(I)基因在活化的HSC中表达,在其转录调控中起重要作用.
