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储存红细胞ATP代谢circRNA筛选及功能预测
目的 筛选4℃储存前、后期红细胞差异表达的circRNA并初步预测其功能.方法 采集健康无偿献血者5(人)份血样200 mL/份,制备成悬浮红细胞,滤除白细胞后(悬浮滤白红细胞)分为3组:4℃储存0、20及40 d组,对3组标本用第2代高通量测序技术检测,根据FDR＜0.05且｜log2FC｜＞1这2个条件,以火山图和表达模式聚类分析筛选出差异基因并用cytoscape作出mRNA—circRNA—miRNA网络图;通过KEGG和GO分析筛选出与ATP代谢相关的circRNA验证;后通过生信软件预测hsa_circ_0007470—hsa-miR-155-5p—MRP4的分子结合具体区域及生物学功能.结果 红细胞储存20d较0d时差异表达的circRNA有119个,40d较20 d时差异表达的circRNA有110个,2个储存阶段都有差异表达的circRNA共有41个.KEGG和GO分析显示在差异表达的circRNA中hsa_circ_0007470的亲本基因MRP4富集于cAMP代谢通路.mireap、miranda、targetscan、circBase、miRBase、mirTarBase软件分析及序列比对显示hsa_circ_00007470可与hsa-miR-155-5p结合;hsa-miR-155-5p可与MRP4结合.经PCR验证,红细胞储存在0、20、40d时,hsa_circ_00007470、MRP4、hsa-miR-155-5p的变化倍数分别为1.00±0.02、1.36±0.09、0.53±0.16,1.00±0.01、1.87±0.48、0.45±0.20,1.00±0.02、0.43±0.20、0.98±0.29.红细胞储存0、20、40 d时,总ATPase(U/gHb)分别是40.87±5.883、18.300±2.847、10.21±1.636;ATP (U/gHb)分别是8.708± 1.25、3.082±0.166、2.462±0.252.结论 储存红细胞中存在circRNA,且含量会随储存时间发生改变,储存20 d后红细胞的hsa_circ_00007470与ATPase及ATP表达呈同向相关性,hsa_circ_00007470或许能解除hsa-miR-155-5p对MRP4的抑制作用,通过ATP代谢途径改善红细胞变形能力.
