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cTnC-linker-TnⅠ(P)文献资料
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cTnC-linker-TnⅠ(P)基因的构建、融合蛋白表达及冻干品的制备
从GenBank中检索人源心肌肌钙蛋白C亚基(cTnC)和心肌肌钙蛋白Ⅰ亚基(cTnⅠ)编码序列,合成cTnC和cTnⅠ第30至110氨基酸基因-cTnⅠ(P),并在两者之间合成一段由15个氨基酸(G4S)3组成的接头(linker)序列.构建原核表达载体pColdⅠ-cTnC-linker-TnⅠ (P),转化大肠杆菌BL21 (DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,结果在大肠杆菌中成功实现了eTnC-linker-TnⅠ(P)融合蛋白的稳定可溶性高表达.经Ni2+柱纯化后得到纯度大于95％的cTnC-linker-TnⅠ(P)融合蛋白,制备冻干品并采用万孚飛测@心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)定量检测试剂盒检测其稳定性.cTnC-linker-TnⅠ(P)冻干品在37℃可稳定保存10 d以上,25℃、4℃稳定保存4个月以上.本研究获得的cTnC-linker-TnⅠ(P)融合蛋白活性高,冻干品稳定性好,为后续研究提供了稳定高效的生物原材料.
