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乙酸镍诱导16HBE细胞恶变过程中的K-ras和P15基因的改变及基因组不稳定性分析
目的:检测乙酸镍对K-ras基因和P15基因的改变及基因组不稳定性的影响,从而进一步探讨镍化合物致癌的分子机制.方法:采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析方法探查乙酸镍在诱导16HBE细胞恶变过程中的K-ras基因Exon1和P15基因Exon2存在状况.采用随机扩增多态性技术对乙酸镍在诱导16HBE细胞恶变过程中的基因组不稳定性进行分析.结果:K-ras基因Exon1和P15基因Exon2未发生改变.本实验所选用的7条随机引物均能扩增出清晰、明显的条带,条带数在1-6条之间.7条引物中P4、P7二条引物扩增的片段在实验组和对照组之间无差异.其余5条引物均有差异,对于同一随机引物他们都具有特异的带型.结论:P15基因第2外显子和K-ras基因第1外显子(包括第12、13密码子)可能不是乙酸镍作用的靶部位.在乙酸镍诱发细胞恶性转化过程中,基因组变得逐渐不稳定.
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乙酸镍对人支气管上皮细胞系的恶性转化研究
目的: 建立乙酸镍(nickel acetate)对永生化人支气管上皮细胞系(16HBE)的恶性转化模型,为下一步关于镍化合物致癌的分子机制的研究提供相应的恶性转化细胞. 方法: 通过克隆形成率实验确定乙酸镍对16HBE细胞转化浓度后,对16HBE细胞进行分阶段多次染毒:每隔20 d染毒1次,每次染毒24 h.染毒12次后,通过软琼脂集落形成试验和裸鼠体内致瘤试验鉴定细胞恶性转化程度. 结果: 经乙酸镍多次处理16HBE细胞至75代时,细胞生长速度加快,排列紊乱,失去接触抑制,出现复层生长,并可在软琼脂上生长,且呈剂量反应关系,但在第75代之前的细胞则不能在软琼脂上生长.转化细胞在裸鼠体内成瘤,病理组织学证实为低分化鳞状细胞癌. 结论: 乙酸镍具有使16HBE细胞发生恶性转化的能力.
