首页 > 文献资料
-
小鼠MIP-3α基因在Lewis肺癌中的放射诱导表达
目的构建pEgr-1-MIP-3α(pEM)质粒,探讨辐射对被转染的Lewis肺癌细胞中MIP-3α表达的影响.方法用定向克隆方法,构建pEM重组表达质粒,脂质体介导转染Lewis肺癌细胞,用RT-PCR和ELISA方法检测不同剂量电子线照射后的MIP-3α表达水平.结果本实验构建的重组质粒pEM中MIP-3α cDNA正确插入表达载体;各照射组在不同剂量电子线照射后,MIP-3α表达均高于未转染组和假照射组.结论 Egr-1启动子具有辐射启动和诱导下游MIP-3α基因在Lewis肺癌中增强表达的功能,为pEM用于放射-基因治疗的体内研究,提供了实验基础.
-
pEgr-MIP3α重组质粒的构建及其在Lewis肺癌细胞中的辐射诱导表达
目的探讨辐射对转染pEgr-MIP3α质粒的Lewis肺癌细胞MIP3α表达的影响.方法用PCR方法扩增出MIP-3α基因,构建pEgr-MIP3α重组表达质粒,脂质体介导转染Lewis肺癌细胞,用RT-PCR和Western方法检测不同剂量X射线照射后的MIP-3α表达水平.结果所构建的重组质粒pEgr-MIP3α中MIP-3αcDNA正确插入表达载体;各照射组在不同剂量电子线照射后,MIP-3α表达均高于未转染组和假照射组.结论 Egr-1启动子具有辐射启动和诱导下游MIP-3α基因在Lewis肺癌中增强表达的功能,为pEgr-MIP3α用于放射-基因治疗的体内研究提供了实验基础.
关键词： 巨噬细胞炎症蛋白3α 早期生长反应启动子 树突状细胞 放射基因治疗 -
放射诱导的一氧化氮同步放大基因电路的构建及鉴定
背景与目的 正反馈基因电路(gene circuits)对基因表达有放大作用,目的基因在细胞内的同步化表达可进一步增强基因治疗效果.本研究旨在构建由放射诱导的一氧化氮(nitric oxide,NO)同步放大基因电路,以探索提高目的基因表达水平、延长表达时间的新途径,从而进一步完善肿瘤放射基因治疗模式.方法 将具有放射诱导性的c-fos启动子与诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)串联,构建c-fos启动子驱动的iNOS和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)双顺反子表达载体pfosiNOS/GFP用脂质体介导该载体转染肺腺癌A549细胞,予以一定剂量照射,观察照射后不同时相点细胞荧光强度,检测iNOS蛋白表达水平.结果 转染载体pfos-iNOS/GFP的细胞照射后细胞荧光强度、iNOS表达水平均较对照组明显增加,其中以照射后16 h增加为明显.结论 成功构建了放射诱导的NO同步放大基因电路,大大提高了放射诱导的目的基因的表达水平,为进一步提高肿瘤放射基因治疗的疗效奠定了理论基础.
