首页 > 文献资料
-
利用简并PCR克隆烟草节杆菌02181肌酸酶基因
目的 用简并PCR从烟草节杆菌02181中扩境出肌酸酶部分序列,以期获得其全长编码基因.方法 从NCBI查询已发表的肌酸酶蛋白序列,将其递交到Bolck Maker服务器,利用工具软件CODEHOP设计简并引物,以烟草节杆菌02181基因组DNA为模板做PCR.结果 将所得目的片段(414 bp)在NCBI上BLASTx,结果表明,所得序列与不同菌种来源的肌酸酶高度同源,其中与节杆菌属肌酸酶基因的同源性高,一致性达到了71%.结论 从烟草节杆菌02181中成功克隆出了肌酸酶基因的部分序列.
关键词： 肌酸酶 简并PCR Block Maker CODEHOP -
烟草节杆菌02181肌酸酶的基因克隆
目的 在已知烟草节杆菌02181肌酸酶基因部分序列的基础上,从烟草节杆菌02181基因组DNA中克隆得到肌酸酶全基因.方法 根据已得到的肌酸酶部分序列,利用基因组步移技术,分别克隆得到肌酸酶基因已知部分序列的上、下游序列,再将3段序列拼接,得到肌酸酶全基因,并在NCBI上检索证实.结果 得到的烟草节杆菌02181肌酸酶基因的全长序列,在NCBI上检索后证实为一新基因,该基因全长1 254 bp(含终止密码子TAA),为一完整的开放读码框架(ORF),编码417个氨基酸,理论分子量为46 377 Da,并与多种不同来源的肌酸酶有着较高的同源性.其中,与Arthrobacter sp.FB24来源的肌酸酶氨基酸序列的一致性达到了80%(332/417),同源性则达到了87%(365/417).结论 成功地克隆了烟草节杆菌02181肌酸酶基因,为今后的基因表达奠定了基础,也为肌酐测定试剂的国产化迈出了坚实的一步.
-
肌酐测定的酶学方法
血清和尿中肌酐测定可为临床评价肾小球滤过功能提供客观指标,因而是临床常做的生化检验项目.肌酐测定方法可分为化学法和酶法两大类.化学法有多种,但大都以1886年Jaffe氏建立的碱性苦味酸法(Jaffe反应)为基础,其主要缺点是反应的特异性差.
