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HIV-1 Rev蛋白和人DDX3解旋酶对HCV RNA复制影响
目的 研究人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)病毒颗粒蛋白表达调节因子(regulator of virion protein expression,Rev)和DEAD-box蛋白家族ATP依赖的RNA解旋酶3(DDX3)对HCV RNA复制的影响.方法 利用HCV表达质粒pCDNA3.1-JFH1转染Huh7细胞以构建稳定的HCV细胞复制模型,另构建pCDNA3.1-Rev-Flag-mCherry和pCDNA3.1-DDX3-YFP-Flag的过表达载体,通过PCR、Western blot和核苷酸测序等方法鉴定载体构建成功后,将实验分为2组对照实验,对照组均只将HCV复制质粒转染Huh7细胞:1组实验组为DDX3和HCV RNA复制质粒共转染入Huh7细胞;2组的实验组为Rev、DDX3和HCV RNA复制质粒共转染入Huh7细胞.后通过qPCR定量测定各组HCV RNA复制水平并进行比较.结果 转染后48 h测各组HCV RNA的复制水平,DDX3+HCV RNA复制质粒组中HCV RNA的水平(1.09 ×107 ±0.18×107)明显高于单独转染HCV RNA复制质粒组(4.79×106±1.24×106) (P =0.03);而Rev+ DDX3+HCV RNA复制质粒组中HCV RNA的水平(1.74×107 ±0.40×107)明显低于单独转染HCV RNA复制质粒组(4.17×107 ±0.46×107)(P＜0.001).结论 成功构建Rev蛋白和DDX3的过表达载体,并初步证明人DDX3解旋酶可促进HCV RNA的复制,而Rev蛋白和DDX3共同作用可抑制HCV RNA的复制.
