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液相芯片检测3种发热伴出疹病毒方法的建立
目的 建立一种能同时检测发热伴出疹症候群中的肠道病毒71(EV71)、柯萨奇病毒A组16(CA16)和麻疹病毒(MV)的高通量液相芯片检测方法.方法 针对EV71、CA16和MV全基因组序列,分别设计特异性引物和探针,经多重PCR扩增并用生物素标记相应的基因片段,建立EV71、CA16和MV高通量核酸液相芯片检测方法.并对该方法灵敏度、特异度进行验证.结果 液相芯片检测方法对EV71、CA16和MV的检测结果与多重PCR的检测结果一致.该方法能同时完成对其中任何1种及3种病毒的检测,特异性好,灵敏度低可达2.14 pg/μl.结论 该方法用于3种发热伴出疹症候群病毒的检测具有较高的灵敏度和特异性,可用于EV71、CA16和MV的实验室检测.
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9种发热伴出疹病原体基因芯片检测方法的建立
目的 建立一种能同时、快速、准确地检测包括:麻疹病毒、风疹病毒、肠道病毒71型、水痘带状疱疹病毒、登革热病毒、人类小DNA病毒B19、柯萨奇病毒A16型、A组 β型酿脓链球菌(溶血性链球菌)、伤寒沙门菌,9种发热伴出疹病原体的化学发光基因芯片的方法.方法 根据9种病原体特异基因中的高度保守区序列设计引物与探针,进行多重不对称PCR扩增,将带有标记的扩增产物与带有特异性探针的芯片杂交,经洗涤、化学发光显色后进行结果分析.经多重PCR体系、杂交反应和化学发光检测条件的优化,评价该芯片的特异性、灵敏度和重复性.实时荧光PCR法与芯片法分别检测肠道病毒EV71梯度稀释的核酸,比较两种方法的灵敏度.结果 共筛选出9对特异性扩增引物和11条特异性检测探针.该芯片具有良好的特异性、灵敏度和重复性.质粒参考品和体外转录RNA参考品的低检测限为3×103拷贝/反应,芯片法的灵敏度为实时荧光PCR法的1/10.检测74例临床样本的灵敏度为95%,特异性为85.7%,总符合率为93.2%.结论 建立了一种可同时检测9种发热伴出疹病原体的化学发光基因芯片的检测方法,为发热伴出疹的临床诊断和流行病学调查提供了一种高通量的筛查手段.
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黑龙江省2012-2014年发热出疹性疾病病原谱分析
目的 分析2012-2014年黑龙江省发热伴出疹的病原谱构成.方法 应用实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法对337例临床标本进行肠道病毒、水痘-带状疱疹病毒、风疹病毒、麻疹病毒、人类小DNA病毒B19的病原学检测.结果 337例标本中病毒核酸阳性结果共232份,其中EV71阳性33份,阳性率为14.22％;CVA 16阳性42份,阳性率为18.10％;其他肠道病毒阳性7份,阳性率为3.0％;CVA6阳性46,阳性率为19.83％;CVA10阳性5份,阳性率为2.2％;水痘-带状疱疹阳性69份,阳性率为29.74％;风疹阳性15份,阳性率为6.5％;麻疹阳性15,阳性率为6.5％.结论 肠道病毒是黑龙江省发热伴出疹性疾病的主要的病原体,其次是水痘,再次是麻疹和风疹,肠道病毒每年流行的优势基因型不同.
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黑龙江省2011年发热伴出疹性疾病病原调查
发热伴出疹性疾病包括麻疹、风疹、水痘、登革热和手足口病等等[1],是指临床表现为发热伴出疹,发热≥37.5℃,持续一天以上,伴有全身或局部的皮肤或黏膜出疹,并可能伴有其他临床症状的一系列疾病的总称.2008年,卫生部和科技部启动了"传染病防治关键技术平台"项目.由于不同地区不同时间的病原谱构成可能不同,黑龙江省作为东北片区参加研究单位之一,也逐步开始发热伴出疹性疾病病原谱研究工作.现将2011年223例标本的监测结果进行分析.
