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从人源性噬菌体抗体库中筛选人抗HBsAg的Fab噬菌体抗体
目的从人源性噬菌体抗体库中筛选人抗HBsAg Fab噬菌体抗体。方法用固相化HBsAg对所构建的噬菌体抗体库进行三轮淘筛,从中筛选人抗HBsAg Fab噬菌体抗体。结果第三轮淘筛后洗脱下来的噬菌体,较第一轮增加80倍,含有抗体轻链基因和重链基因的克隆,也由淘筛前的17%增至100%,经ELISA证实,筛选到的抗HBsAg噬菌体抗体对HBsAg具有良好的结合活性,而与牛血清白蛋白和HAVAg等无关抗原均不反应。结论 HBsAg对抗体库的淘筛,富集了表面呈现抗HBsAg的单克隆抗体的噬菌体。
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人组合抗体库(HuCAL)的构建及其优化
基于抗体结构信息、通过聚类分析建立的全合成人组合抗体库(the fully gene-synthetic human combinational antibody library,HuCAL)由Peter Pack等于1997年率先提出.与其它抗体库不同,HuCAL由源于人免疫系统胚系基因分类获得的7个VH、7个VL(4个Vκ、3个Vλ)主架序列及CDR3库组成,其49个ScFv主架在大肠杆菌周质腔中,均能以分泌形式正确表达;CDR两侧特有的酶切位点,使CDR的替换非常方便;同时,由于CDR3库在构建时,采用了三联核苷酸突变技术,增加了随机化的准确性和效率,使抗体库的质量得到极大的提高.构建好的HuCAL经多种抗原筛选后,产生了一大批高亲和力结合子,且筛出的抗体表达量、热稳定性较好.由于HuCAL主架基因是人免疫系统胚系基因的通用序列,其免疫原性大大降低,可用于产生体内诊断性或治疗性的人源抗体.本文对HuCAL的构建及其优化进行综述.