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缺氧对H9C2心肌细胞中miR-19a-3p表达的研究
目的 检测大鼠H9C2心肌细胞缺氧后细胞水平和培养液中循环微小RNA(miRNA,miR)-19a-3p的表达,并探讨其与可能靶基因低密度脂蛋白受体相关蛋白2(LRP2)的关系.方法 对 H9C2心肌细胞进行缺氧(37 ℃,5% CO2,1% O2)0、4、8、12、16、20、24 h处理,采用荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测其在不同时间点细胞水平和培养液中循环 miR-19a-3p的表达水平,使用ELISA、qRT-PCR、Western Blot 检测LRP2在培养液和细胞中mRNA和蛋白表达.结果 H9C2细胞培养液中miR-19a-3p的表达在缺氧0、4、8、12、16 h差异无统计学意义(P>0.05),在缺氧20 h与24 h时,H9C2细胞培养液中miR-19a-3p的表达与缺氧0 h比较,明显高表达(P<0.05);在缺氧20 h与24 h时,H9C2细胞中miR-19a-3p的表达与缺氧0 h比较,明显下降(P<0.05);H9C2细胞培养液中LRP2的表达在缺氧16 h后表达明显升高,缺氧16 h[(675.2 ± 42.4) ng/mL,n=3]、缺氧20 h[(979.4 ± 204.2)ng/mL,n=3]和缺氧24 h[(1456.0 ± 363.6)ng/mL,n=3]较0 h [(245.0 ± 10.84)ng/mL,n=3]明显升高(P<0.05);H9C2细胞中LRP2 mRNA表达水平在缺氧16 h后表达明显升高,缺氧16 h[(0.000503 ± 0.000100)ng/mL,n=3]、缺氧20 h[(0.001303 ± 0.000090)ng/mL,n=3]和缺氧24 h[(0.001617 ± 0.000110)ng/mL,n=3]较0 h[(0.0001394 ± 0.0000600)ng/mL,n=3]明显升高(P<0.05);20 h[(0.235000 ± 0.003427)ng/mL,n=3]与24 h[(0.535000 ± 0.003427)ng/mL,n=3]LRP2蛋白表达与0 h[(0.14010 ± 0.01821)ng/mL,n=3]比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 miR-19a-3p可能参与大鼠H9C2心肌细胞的缺氧坏死过程,并且可能通过调控LRP2而发挥作用.
