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PUC57质粒文献资料
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微滴数字PCR检测含有目的基因的PUC57质粒问题分析
目的 探讨微滴数字聚合酶链反应(ddPCR)检测含有目的基因的PUC57质粒过程中出现的问题及解决方法.方法 用ECORⅠ酶37℃孵育含有目的基因的PUC57质粒2 h和4 h,然后65℃孵育20 min,灭活ECORⅠ酶.用伯乐QX200TM微滴式数字PCR分别检测PUC57质粒和经ECORⅠ酶酶切后的PUC57质粒,同时对酶切后的PUC57质粒分多天进行检测,对检测结果进行比较.结果 含有目的基因的PUC57质粒经ECORⅠ酶酶切2 h和4 h后的检测值与质粒理论值之间差异无统计学意义(t=-0.192、-0.403,P>0.05),同时酶切与没有酶切的PUC57质粒检测值之间差异有统计学意义(Z=-4.194,P<0.05).酶切后的检测值与PUC57质粒理论值相符合.酶切后的PUC57质粒随着放置时间的延长,检测值逐渐降低.结论 用伯乐QX200TM微滴式数字PCR检测含有目的基因的PUC57质粒时要先酶切再检测,酶切时间只需2 h即可将质粒酶切完全,同时酶切的PUC57质粒要尽快检测.
关键词： 微滴数字聚合酶链反应 PUC57质粒 酶切
