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两种方法分离小鼠脾原始T淋巴细胞效果比较
目的 比较Ficoll-Paque梯度离心法与免疫磁珠法分离T淋巴细胞的效果差异,筛选有效的、优异的分选小鼠脾原始T淋巴细胞方法. 方法 分别采用Ficoll-Paque梯度离心法及Miltenyi Biotec免疫磁珠进行小鼠淋巴细胞分离.血小板计数器统计单核淋巴细胞数,苔盼蓝染色判断细胞存活率,流式细胞术鉴定CD4+CD62+T淋巴细胞纯度,并进行统计学分析. 结果 免疫磁珠法CD4+CD62+T淋巴细胞纯度较高为(66.27±3.52)％,Ficoll-Paque梯度离心法细胞纯度为(15.27±4.16)％,两者比较差异有统计学意义(P＜0.01)；但Ficoll-Paque梯度离心法获取淋巴细胞数(1.47±0.35)×108较免疫磁珠法的(0.67±0.26)×108多,两者比较差异有统计学意义(t=8.199,P＜0.01),且Ficoll-Paque梯度离心法细胞存活率(93.9±2.6)％较免疫磁珠法的(89.9±2.9)％高,两者比较差异亦有统计学意义(P＜0.05). 结论 免疫磁珠法适合分离小鼠脾原始T淋巴细胞并用于细胞纯度要求高的免疫学实验,但细胞得率需进一步优化.
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恒河猴外周血调节性T淋巴细胞的分离纯化及鉴定
目的 建立恒河猴外周血CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(regulatory T cells,Tregs)快速有效的分离纯化方法.方法 4～5岁健康恒河猴10只,雌性4只,雄性6只,体重5～8 kg;于大隐静脉抽取外周血,每只抽取8 mL.密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),分别采用非人灵长类Tregs 分离试剂盒的生物素标记的混合抗体和磁珠标记的抗生物素抗体阴性分选,以及大鼠抗人CD4-活化蛋白C(activated protein C,APC)和抗APC多选试剂盒中的磁珠标记的抗APC抗体阳性分选出CD4+T淋巴细胞,比较两种方法获得细胞的得率、活性及纯度;选择得率、活性和纯度较高的分选方法获得的CD4+T淋巴细胞,用磁珠标记的抗人CD25抗体进行阳性分选,获得CD4+CD25+ Tregs,流式细胞仪检测纯度、活性及FoxP3表达水平,以及Tregs对刀豆蛋白(concanavalin A,ConA)刺激的自体CD4+CD25-效应性T淋巴细胞(effective T cells,Teffs)增殖的抑制功能.结果 CD4+T淋巴细胞阳性分选和阴性分选后,细胞活性均达95％左右,差异无统计学意义(P＞0.05),但阳性分选后CD4+T淋巴细胞得率和纯度均显著高于阴性分选(P＜0.05).后续CD4+CD25+ Tregs分选采用阳性分选法获得的CD4+T淋巴细胞.经双阳性分选收集的目的细胞中CD4(+)CD25+ Tregs占76.2％±8.6％,活细胞比例为93.3％±4.7％,FoxP3阳性细胞比例为74.2％±6.9％.混合培养后Tregs均对ConA刺激的Teffs的增殖有抑制作用.结论 免疫磁珠双阳性分选法能有效分选出恒河猴外周血中有功能的CD4+CD25+ Tregs.
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血浆置换淋巴细胞分离用于肾移植(附4例报告)
随着环孢A的应用,肾移植术后肾/人的成活率有了明显提高,但仍有部分高敏患者因超急性排斥反应或耐激素的排斥反应导致移植失败.我院采用血液成分分离技术行血浆置换和淋巴细胞分离(去淋巴细胞)作为高敏患者的术前准备和耐激素排斥反应时的治疗手段.现将初步结果报告如下:
