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肿瘤坏死因子α对类风湿关节炎患者外周血单核细胞向破骨细胞分化的影响
目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对类风湿关节炎(RA)患者外周血单核细胞向破骨细胞分化的影响.方法 采集RA患者外周血,密度梯度离心后经贴壁法纯化后获得单核细胞,分为A组、B组、C组、D组、E组、F组,分别加入核因子κB受体活化因子配体(RANKL)0 ng/ml+TNF-α0 ng/ml、RANKL 100 ng/ml+TNF-α0 ng/ml、RANKL 0 ng/ml+TNF-α5 ng/ml、RANKL 100 ng/ml+TNF-α2.5 ng/ml、RANKL 100 ng/ml+TNF-α5 ng/ml、RANKL 100 ng/ml+TNF-α10 ng/ml进行诱导培养.细胞培养14天后通过细胞形态学特征及抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定所得细胞,并对TRAP染色阳性细胞进行计数.免疫印迹法检测TRAP染色阳性的各组细胞核因子 κB受体活化因子(RANK)、活化T细胞核因子c1(NFATc1)蛋白的表达.结果 TRAP染色显示,A组、C组获得的细胞不具有典型破骨细胞特征,B组、D组、E组和F组的细胞符合破骨细胞TRAP染色特征.D组、E组和F组TRAP阳性细胞计数、RANK及NFATc1蛋白表达均高于B组(均P<0.05).结论 在缺乏RANKL的条件下,TNF-α不能独立诱导RA患者外周血单核细胞分化为破骨细胞,但存在RANKL时TNF-α能增加RANKL诱导生成的破骨细胞数量,这可能与其上调RANK、NFATc1蛋白的表达有关.
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OPG/RANKL/RANK系统参与牙槽骨吸收及重建过程作用初探
目的 初步探讨护骨素OPG、核因子κB受体活化因子配体RANKL、核因子κB活化因子RANK在牙周炎牙槽骨吸收及骨重建过程中的作用.方法 对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞株RAW264.7实验组进行体外诱导培养,对照组为完全培养基培养；小鼠成骨样细胞株MC3T3-E1实验组采用前期实验收集的骨吸收上清处理,对照组采用完全培养基培养；以免疫荧光等方法检测细胞OPG、RANKL、RANK的表达.30只8周龄雄性SD大鼠建立实验性牙槽骨吸收模型,研究其吸收重建规律.以免疫组化S-P法检测OPG、RANKL、RANK的表达情况.结果 实验组MC3T3-E细胞经骨吸收上清处理7d后,OPG蛋白平均荧光强度为(29.636±5.652),对照组为(15.568±1.229),表达显著上调(P＜0.01)；但实验组RANKL蛋白平均荧光强度为(6.806±1.738),对照组为(18.082±2.732),表达被显著抑制(P＜0.01),OPG/RANKL比值在上清处理后高于对照组(P＜0.05).采用大肠杆菌内毒素E-LPS注射法成功制备大鼠牙槽骨吸收模型.在牙槽骨吸收区域OPG水平较无骨吸收区域有所降低,RANKL的表达则相反.结论 OPG、RANKL、RANK参与了大鼠实验性骨吸收活动；破骨细胞骨吸收上清可能通过改变OPG与RANKL的比值,从而影响骨重建中骨形成与骨吸收的动态平衡.
