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提高BrdU标记成年大鼠在体脑神经干细胞增殖和分化效率的研究
目的 探讨合理利用BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)单标成年在体脑神经干细胞增殖以及双标成年在体脑神经干细胞分化的策略.方法 在BrdU通过腹腔注射6 h后或在BrdU腹腔注射后14～21 d将大鼠灌注固定,继之用邻片进行H-E染色以作定位,分别对脑组织切片进行BrdU单标或BrdU+NT(神经丝,成熟神经元的标志物)、BrdU+GFAP(胶质原纤维酸性蛋白,成熟星形胶质细胞的标记物)以及BrdU+GC(半乳糖脑苷脂,成熟少突胶质细胞的标记物)的双标免疫组织化学反应,光镜下观察和计数单标或双标的阳性细胞.结果 BrdU单标阳性细胞多见于侧脑室的SVZ(室管膜下区)和SGZ(齿状回颗粒下区),而BrdU+NT阳性细胞多位于嗅球和齿状回的颗粒细胞层,BrdU+GFAP阳性细胞多见于SVZ或SGZ;BrdU+GC阳性细胞数少,散在分布于以上四个部位内.结论 在进行BrdU标记脑神经干细胞前应该制定优化组合方案,以获得佳的单标和双标的识别效果.
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缺氧培养下大鼠视网膜祖细胞与脑神经干细胞内钙离子浓度差异的研究
目的:比较缺氧培养条件下新生大鼠视网膜祖细胞(retinal progenitor cells,RPCs)与脑神经干细胞(neural stem cells,NSCs)钙离子浓度的差异.方法:分离新生大鼠RPCs及大脑皮质NSCs,进行无血清体外培养;采用荧光免疫细胞化学的方法进行干细胞鉴定;缺氧培养后,光镜观察细胞形态,采用钙离子荧光探针结合激光共聚焦显微镜测定细胞内钙离子荧光强度.结果:缺氧培养后,大脑皮质NSCs较早出现肿胀、伸出突起等变化,随缺氧时间延长,两种细胞内钙离子荧光强度逐渐增强,缺氧12h后RPCs内钙离子荧光强度小于脑皮质NSCs(P<0.05),差异具有统计学意义.结论:缺氧培养12h RPCs内钙离子浓度低于大脑皮质NSCs.
