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细胞外调节蛋白激酶8文献资料
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His-细胞外调节蛋白激酶8融合蛋白的表达与纯化
目的:对细胞外调节蛋白激酶(ERK)8进行表达、纯化及活性鉴定.方法:PCR扩增目的基因ERK8,进行BamH Ⅰ和HinⅢ双酶切,与经BamH Ⅰ和HindⅢ表达载体pET-28a进行连接,转化大肠杆菌BL21,以不同浓度(0.2、0.4、0.8、1.0mmol/L)异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)和不同温度(15、20、25、37℃)对重组质粒进行诱导表达,并用Westemblot技术鉴定表达的融合蛋白;用Nf+金属螯合亲和层析柱法对融合蛋白进行纯化.结果:成功构建pET-28a-ERK8重组质粒,并获得纯化的有活性的His-ERK8融合蛋白,且IPTG终浓度为0.2 mmol/L,温度37℃,时间5h下,该融合蛋白的表达量大.结论:通过对pET-28a-ERK8的构建和ERK8蛋白表达与纯化,为进一步研究ERK8蛋白的结构和功能奠定实验基础.
关键词： 细胞外调节蛋白激酶8 构建 表达与纯化
