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16kD蛋白文献资料
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结核分枝杆菌16kD-CFP10-19kD融合蛋白的构建表达及纯化
目的 构建结核分枝杆菌(MTB)16kD-CFP10-19kD融合蛋白表达载体,在大肠杆菌中对蛋白进行表达并经过纯化获得16kD-CFP10-19kD融合蛋白.方法 利用聚合酶链式反应(PCR)方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板扩增16kD、CFP10及19kD基因,经过限制性内切酶处理并依次与pET28a载体连接,构建pET28a-16kD-CFP10-19kD重组质粒,转化至大肠杆菌表达株BL21中,在IPTG及低温诱导下获得目标蛋白,镍柱层析获得纯化蛋白.结果 经过酶切及测序鉴定验证pET28a-16kD-CFP10-19kD重组质粒构建正确,原核表达获得可溶性目标蛋白并对其初步纯化.结论 成功构建表达并纯化获得16kD-CFP10-19kD融合蛋白,为开发新的结核病特异性诊断抗原研究奠定基础.
