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甲状旁腺激素通过NF-κB诱导人近曲小管上皮细胞结缔组织生长因子表达
目的 观察甲状旁腺激素(PTH)对人肾小管上皮细胞分泌结缔组织生长因子(CTGF)的影响,并探讨其信号传导通路及NF-κB在此过程中的作用.方法 应用荧光实时定量PCR、Western印迹技术,观察PTH诱导人近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞CTGFmRNA和蛋白合成情况;从转录水平探讨PTH对CTGF基因启动子活性的调控作用.采用凝胶迁移实验(EMSA)技术检测PTH刺激HK-2细胞后NF-κB的DNA结合能力;NF-κB抑制剂PDTC阻断信号通路以明确PTH发挥作用的信号途径.结果 HK-2细胞有基础量的CTGFmRNA表达和蛋白合成,PTH刺激后其表达及合成量显著增加.PTH佳刺激浓度是10-10 mol/L,佳刺激时间是72 h.10-10 mol/L PTH作用HK-2细胞12 h后,荧光素酶活性显著高于未刺激组(1.8884±0.0780比0.9891±0.0300,P＜0.01).正常情况下,胞核内NF-κB处于无活性状态,PTH刺激HK-2细胞后,NF-κB的DNA结合能力明显增强,10-10 mol/L PTH作用30 min时NF-κB活性达到高峰;而后随FTH浓度和作用时间增加,NF-κB活性有所下降.PDTC预处理HK-2细胞后,PTH诱导细胞CTGF mRNA表达显著低于PTH组(0.33±0.05比3.84±0.68,P＜0.05),CTGF蛋白表达亦显著低于PTH组(0.56±0.23比3.76±0.54,P＜0.01);PDTC亦显著抑制CTGF基因启动子活性,其萤火虫荧光素酶相对活性显著低于PTH组(1.1942±0.0107比1.8884±0.0780,P＜0.01).结论 PTH可诱导HK-2细胞高表达CTGF,且在一定范围内呈时间、剂量依赖,其作用可能是通过NF-κB信号通路来实现的.
