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投射电镜文献资料
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心脏干细胞来源的exosomes通过传递miR－21抗心肌细胞凋亡
目的：心脏干细胞移植治疗急性心梗的机制不明，而新研究发现外泌体（ exosomes ）是干细胞与心肌细胞信号交流的重要媒介。本研究通过解析心脏干细胞分泌外泌体的成分，阐明其中参与心肌保护作用的物质以及调控机制。方法：采用体外分离成年小鼠心脏的Sca－1＋心脏干细胞（ Sca－1＋CPCs ），从Sca－1＋CPCs的培养上清中分离提取其分泌的exosomes ，用Nano－sight、投射电镜、Western blot等对exosomes进行鉴定，qPCR解析exosomes中的内容物，找出关键调控的miRNA，并且通过转染以及萤光素酶报告基因的实验证实其调控的靶基因；后，细胞加入exosomes预保护后，检测其关键miRNA及其靶蛋白的表达，流式细胞术检测凋亡细胞比例的变化。结果：Sca－1＋CPCs细胞上清中提取的物质是直径在80 nm左右的双分子层囊泡，且表达CD9、CD63和Alix 3种exosome标志蛋白。氧化应激可以促进CPCs分泌exosomes，这种exosomes中miR－21表达明显增加，并且被心肌细胞摄取，miR－21通过与PDCD4靶向结合抑制心肌细胞在氧化应激损伤下的凋亡，加入exosomes对细胞进行保护后，在同样环境下可明显上调细胞内miR－21，且发现PDCD4及cleaved caspase－3的表达明显下调，凋亡细胞的比例明显减少。结论：心脏干细胞通过分泌的exosomes，将其包裹的miR－21进入到心肌细胞中抑制PDCD4的表达，从而抗心肌细胞凋亡。本研究为阐明干细胞治疗心肌梗死的作用机制提供了新的视野。
