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可溶性巨噬细胞集落刺激因子文献资料
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可溶性巨噬细胞集落刺激因子受体基因的克隆和原核表达
目的:克隆可溶性巨噬细胞集落刺激因子受体(sMR)基因,在大肠杆菌中表达,经纯化、复性后获得活性蛋白.方法:从人骨髓细胞中提取总RNA,在sMR基因引物两端分别加上NdeⅠ和BamHⅠ酶切位点,利用RT-PCR技术扩增sMR基因,经NdeⅠ和BamHⅠ酶切后连接到表达载体pET28a,测序证实克隆基因的正确性,并在大肠杆菌BL21菌株中诱导表达,采用his-tag纯化柱纯化目的蛋白,并经复性处理,配体结合实验证实蛋白活性.结果:限制性内切酶切出了预期条带,测序证实了克隆基因的正确性,sMR经诱导后在大肠杆菌中以包涵体形式表达,表达蛋白经纯化和复性处理,获得了具有活性的功能蛋白.结论:成功克隆与表达了sMR基因,得到了具有活性的功能蛋白,为进一步研究其生物学功能和应用奠定了基础.
关键词： 受体 可溶性巨噬细胞集落刺激因子 克隆 原核表达 pET-28a(+) 蛋白质复性
