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CCL3促进人骨髓间充质干细胞增殖并抑制其外泌体的分泌
目的:探讨趋化因子CCL3对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBMSCs)外泌体分泌的调控作用.方法:采用CCK-8法和活细胞计数检测hBMSCs的增殖活性;采用电镜观察、流式细胞术和纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)对外泌体进行定性和定量分析.结果:CCK-8检测显示,CCL3组细胞的存活率大于对照组(P<0.05);活细胞计数结果显示,CCL3组细胞数明显多于对照组(P<0.05),呈浓度依赖性;流式细胞术分析结果显示,hBMSCs表达CCR1、CCR5和CCR93种CCL3特异性受体;CCL3作用hBMSCs后,CCR9荧光强度明显增强,CCR5和CCR1荧光强度无显著差异.NTA结果显示,与对照组相比, CCL3组外泌体分泌量明显减小(P<0.05),同时微囊泡(粒径大于100 nm)数明显增多(P<0.05);外泌体流式细胞术分析结果提示,与对照组相比,CCL3组的CD9 +外泌体阳性率显著下降(P<0.01).结论:CCL3促进hBMSCs增殖并抑制其外泌体的分泌,同时影响hBMSCs外泌体的粒径分布,无效的微囊泡增多.
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健康成人24h尿液细胞外囊泡定量及大小分布
目的 研究观察健康成人24h尿液细胞外囊泡(uEVs)数量、大小分布及个体间差异.方法 利用液压透析滤过法分离9名健康成年人24h uEVs,通过western blot(WB)和透射电镜(TEM)技术验证uEVs的分离效果,应用BCA蛋白定量法及纳米微粒跟踪分析技术分别对富集的uEVs样品进行蛋白定量测定和囊泡数量及大小分布的分析.结果 TEM下可见大小不等、形状不一的囊泡.WB技术检测到外泌体的标记物—人肿瘤易感基因(TSG101).9名健康成人24h尿液分离的uEVs样品蛋白定量范围为132.50～760.70ng/mL.纳米微粒跟踪分析技术检测结果显示24h uEVs数量为(3.56～5.12)×1012个,CV=14.23％.24h分泌的uEVs中,直径在＜40nm范围内的囊泡占所检测到的总囊泡数的0.04～0.69％,数量为(1.80～26.49)×109个;符合外泌体直径范围(40～100nm)的囊泡占总囊泡数的22.07％～42.08％,数量为(1.00～1.77)×1012个.符合微囊泡直径范围(100～1000nm)的囊泡约占总囊泡数的57.88％～77.85％,数量为(2.09～3.86)×1012个.结论 新型液压透析滤过法能高效、便捷地实现大样本尿液uEVs的分离.健康成人分泌的24h uEVs个体间差异较小,是uEVs相关研究较理想的标本来源.
