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肝细胞生长因子/生物合成/分析文献资料
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人肝细胞生长因子真核质粒的克隆及活性测定
目的 构建肝细胞生长因子的真核表达载体,为进一步利用基因治疗肝损伤打下基础.方法 利用DNA体外重组技术,从胎盘提取HGFcDNA克隆到pcDNA3.1载体上,经限制性内切酶、PCR及测序鉴定重组体.转染HepG2和L02细胞并建立稳定细胞株,MTT法测其活性,并通过流式细胞技术检测细胞凋亡.结果 pcDNA3.1-HGF重组体测序结果与Gene Bank对照完全相同,MTT比色结果,转染HGF基因的HepG2细胞增殖速度明显低于未转染HGF基因的HepG2细胞(P＜0.05),而转染HGF基因的L02细胞增殖速度明显高于未转染HGF基因的L02细胞(P＜0.05),细胞流式技术检测结果也与之相符.结论 成功构建了pcDNA3.1-HGF真核表达载体,pcDNA3.1-HGF对HepG2细胞有抑制作用而对L02细胞的生长有促进作用.
关键词： 肝细胞生长因子/生物合成/分析 质粒 克隆 分子
