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BB型/遗传学文献资料
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重组CKB真核表达载体的构建及其稳定转染NCI-H520细胞系的建立
目的 构建pEGFP-N1-CKB真核表达载体并将其稳定转染到肺鳞癌细胞NCI-H520中,建立稳定转染的NCI-H520细胞系,为后续研究奠定基础.方法 以人CKB cDNA文库为模板,用PCR扩增人CKB cDNA的编码区,并将扩增的cDNA片段与载体连接后亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1中.重组子经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术将其导入到人肺鳞癌细胞系NCI-H520,经G418筛选并建立稳定的转染细胞株,应用Western blot检测转染前后该细胞株CKB基因的表达.结果 pEGFP-N1-CKB经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确,真核表达载体构建成功；经Western blot检测,重组质粒转染株中CKB基因的表达水平明显高于对照组,证实CKB基因已稳定转染到NCI-H520细胞中并得到表达.结论 成功构建了pEGFP-N1-CKB真核表达质粒,建立了稳定表达CKB的NCI-H520细胞系,为进一步研究CKB的生物学功能奠定了基础.
