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支气管肺发育不良/遗传学文献资料
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真核表达载体pIRES2-EGFP-SP-B-C/T 1580的构建及其在293T细胞中的表达
目的 构建两种人肺表面活性物质蛋白B(surfactant protein B,SP-B)基因变异型的真核表达载体,研究SP-B基因多态性与支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)的关系.方法 应用基因重组技术,构建pIRES2-EGFP-SP-B-C 1580和pIRES2-EGFP-SP-B-T 1580真核表达质粒,经测序鉴定后,采用脂质体法转染293T细胞系,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在293T细胞中的表达,逆转录-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(reverse transcription-polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,RT-PCR-RFLP)检测SP-B-C/T 1580 mRNA的表达,Westem blot 检测SP-B蛋白的表达.结果 两个重组质粒含有完整SP-B cDNA,在1580位点碱基序列分别为C和T,转染293T细胞后有相应的mRNA及蛋白表达.结论 成功构建了真核表达载体pIRES2-EG-FP-SP-B-C/T 1580,为揭示支气管肺发育不良的发生机制奠定基础.
