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氯沙坦通过降低ADMA水平诱导血管内皮保护作用
目的 本实验拟观察在培养的人脐静脉内皮细胞,氯沙坦对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的血管内皮活化的保护作用是否与降低非对称二甲基精氨酸(ADMA)水平有关.方法 用不同浓度的AngⅡ(10-9～10-6 mol·L-1)孵育不同时间(6～48 h),并加入不同浓度的氯沙坦(1、3、10 μmol·L-1)预处理1 h,检测细胞培养上清液中的ADMA、一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平,细胞中蛋白甲基转移酶(PRMT)蛋白表达、二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)和活化蛋白(AP-1)活性.结果 AngⅡ呈浓度和时间依赖性增加PRMT的表达,AngⅡ(10-6 mol·L-1,24 h)显著增加培养液中ADMA、TNF-α水平,减少NO的生成,降低细胞DDAH活性,增加细胞AP-1活性.氯沙坦可拮抗AngⅡ所致的上述效应.结论 这些结果提示氯沙坦诱导的血管内皮细胞保护作用可能与降低ADMA水平有关.
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巯基耗竭剂DEM对内皮细胞NO通路的影响
目的:通过DEM对内皮细胞二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)活性的影响,探讨内皮细胞NO通路功能障碍的可能机制及其在动脉粥样硬化发病中的作用.方法:在内皮细胞培养中加入不同浓度DEM、作用不同时间,以求出能明显降低细胞内GSH浓度、但却不明显影响细胞存活率的适DEM剂量和时间.以适DEM剂量和时间顸处理内皮细胞后,继续培养24小时,检测各时间段的GSH含量、DDAH活性及NO产量.细胞存活率检测用MTT法;细胞内GSH含量用荧光测定法;DDAH活性用酶反应后分光光度法检测L-瓜氨酸的生成量;用NO试剂盒检测上清液中NO含量.结果:MTT结果显示DEM佳的作用浓度为0.6umol/L,时间为半小时,该浓度DEM处理内皮细胞30分钟后,GSH含量已明显降低,但内皮细胞生存率仅比对照组轻微下降,未明显影响细胞存活率;GSH浓度的检测显示,经DEM预处理后半小时细胞内GSH含量已较对照组明显降低(降低28.7%,p＜0.05),随后逐步回升,12小时反超正常水平,随后回落,至24小时时恢复至正常水平;DDAH活性的检测显示,经DEM预处理后DDAH活性随之降低,至2小时时达低值(降低80.07%,p＜0.01),以后DDAH活性逐渐恢复,24小时后亦出现反超,呈类似于GSH改变的趋势,但时间略滞后;培养液中NO含量在DEM预处理后持续下降,同样于2小时时达低水平,随后逐步回升,变化趋势与DDAH基本相似.上述三者相似的变化规律提示,DDAH酶活性中心-SH受损可能是内皮细胞NO通路功能障碍的重要机制.结论:氧化应激造成NO系统功能障碍的机制可能与DDAH巯基的损伤密切相关.提示保护DDAH的巯基、修复巯基损伤应是对抗各种NO通路损伤因素、包括氧化应激损伤的重要途经之一.
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巯基受损对内皮细胞NO系统的影响
目的 通过检测巯基螯合剂DEM对内皮细胞二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)活性的影响,探讨马来酸二乙酯(DEM)对内皮细胞NO通路功能障碍的影响.方法 找出处理内皮细胞时DEM作为巯基螯合剂的适剂量和时间.以适DEM剂量和时间预处理内皮细胞后,继续培养24小时,检测各时间段的DDAH活性及NO含量.结果 DEM适剂量为0.6umol/L,适作用时间为30分钟.经DEM预处理后DDAH活性随之降低,至2小时时达低值,以后DDAH活性逐渐恢复; NO含量在DEM预处理后显示相似的改变.结论 DEM可导致内皮细胞NO通路功能障碍.提示DDAH活性降低可能与DDAH的巯基受损有关,进一步提示保护DDAH的巯基是对抗各种NO通路功能障碍因素的重要途径之一.
