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人CD154文献资料
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抗人CD154单克隆抗体的构建及免疫学特性分析
为进一步研究人CD154单克隆抗体在抑制动脉粥样硬化发生和发展中的作用,采用重组人CD154分子免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术制备抗人CD154单克隆抗体,并分析其免疫学特性.结果发现,(1)有6c5、1b6、5d3共三株杂交瘤细胞株的培养上清与GST-hCD154融合蛋白反应,与GST不反应.6c5、1b6和5d3培养上清效价分别为1∶128、1∶256和1∶64.(2)经Western-bolt鉴定,在分子质量为56 kDa处有一抗原抗体结合的条带,而分子质量为26 kDa处无特异性条带.证明三株杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体可以结合GST-hCD154但不与GST反应,是特异性结合人CD154的单克隆抗体.(3)流式细胞术发现,6c5细胞株分泌的单克隆抗体能与激活的人外周血T细胞结合.说明已构建的单克隆抗体是特异性针对人CD154的,为下一步用人CD154单克隆抗体抑制动脉粥样硬化的研究打下了基础.
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人CD154基因真核细胞表达载体的构建、鉴定及序列分析
目的 构建人CD154基因真核细胞表达载体。方法 采用RT-PCR方法，从激活的人外周血淋巴细胞的总cDNA中扩增得到820 bp的人CD154 cDNA片段，再用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中，限制性内切酶酶切分析重组质粒和DNA序列分析。结果 人CD154 cDNA已经正确克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中。结论 本研究为探讨CD154分子与淋巴细胞活化的关系及其信号传导机制，为进一步用于抗移植排斥反应的研究，或对由于CD154遗传缺陷所致的免疫缺陷病的基因治疗奠定了基础。
